Введение
1 Обзор литературы 13
1.1 Введение 13
1.2 Методы тканевой инженерии 14
1.3 Децеллюляризация клапанов сердца 16
1.4 Способы децеллюляризации матрикса 18
1.5 Микроструктура аортального клапана человека 22
1.6 Биомеханические свойства клапанов сердца
1.6.1 Биомеханические свойства нативного клапана аорты 25
1.6.2 Биомеханические свойства тканеинженерных клапанов сердца
1.7 Клеточный состав нативного аортального клапана сердца человека 28
1.8 Клетки, используемые в тканевой инженерии клапанов сердца
1.8.1 Клетки, полученные из донорских сосудов 29
1.8.2 Эндотелиальные прогениторные клетки периферической крови 29
1.8.3 Стволовые клетки
1.8.2.1 Мезенхимальные стволовые клетки красного костного мозга 31
1.8.2.2 Мезенхимальные клетки жировой ткани 32
1.8.2.3 Мезенхимальные стволовые клетки амниотической жидкости 33
1.8.2.4 Индуцированные плюрипотентные стволовые клетки 33
1.9 Биореакторы в тканевой инженерии клапанов сердца 34
1.9.1 Статические биореакторы 35
1.9.2 Динамичекие биореакторы
1.10 Преклинические исследования и клиническое применение 38
1.11 Заключение 41
2 Материалы и методы исследования 44
2.1 Забор материала 44
2.2 Выделение гомографта 45
2.3 Децеллюляризация створок аортального клапана и фрагментов восходящей аорты 46
2.4 Гистологическая и иммуногистохимическая оценка
2.4.1 Окраска гематоксилином-эозином 48
2.4.2 Окраска по Ван Гизону 48
2.4.3 Иммуногистохимия 49
2.4.4 Окраска DAPI 2.5 Определение остаточных ДНК и РНК в тканях 49
2.6 Биомеханические исследования
2.6.1 Биомеханические исследования створок аортального клапана 50
2.6.2 Биомеханические свойства восходящей аорты 52
2.6.3 Биомеханическое исследование прочности шва стенки аорты 52
2.6.4 Статистический анализ 53
2.7 Рецеллюляризация 54
2.7.1 Получение клеток для рецеллюляризации 54
2.7.1.1 Получение стволовых клеток красного костного мозга 54
2.7.1.2 Получение стволовых клеток из жировой ткани 56
2.7.2 Рецеллюляризация в статичных условиях 57
2.8 Конструкция биореактора 58
2.9 Децеллюляризация в биореакторе 59
2.10 Рецеллюляризация в биореакторе 61
3. Результаты 63
3.1 Макроскопическая оценка тканей 63
3.2 Поиск эффективного способа децеллюляризации 63
3.3 Оценка результатов окраски по Ван Гизону и на эластин 70
3.4 Результаты иммуногистохимического исследования 71
3.5 Результаты использования красителя DAPI 73
3.6 Определение остаточных ДНК и РНК в тканях 73
3.7 Биомеханические тесты 74
3.8 Рецеллюляризация створок аортального клапана в статичных условиях 77
3.9 Децеллюляризация гомографта с использованием биореактора 79
3.10 Рецеллюляризация в биореакторе 81
4 Обсуждение 83
4.1 Децеллюляризация – надежный способ получения экстрацеллюлярной матрицы створки аортального клапана 83
4.2 Поиск оптимального протокола децеллюляризации 85
4.3 Поиск универсального протокола децеллюляризации 85
4.4 Применение найденного протокола децеллюляризации не влияет на биомеханические свойства структур корня аорты 87
4.5 Необходимость репопуляции тканеинженерного гомографта стволовыми клетками 88
4.6 Применение биореатора улучшает результаты рецеллюляризации 89
4.7 Перспективы исследования 90
Выводы 92
Благодарности 93
Список сокращений 94
Литература
