Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1. Краткая история вопроса 14
1.2. Экстраклеточная ДНК плазмы крови человека 14
1.3. Поглощение ДНК эукариотической клеткой 16
1.4. Утилизация экстраклеточной ДНК, доставленной в ядро эукариотической клетки 21
1.5. Рекомбинация как возможный путь интеграции фрагментов экзогенной ДНК в реципиентный геном 25
1.5.1. Репарация по механизму гомологичной рекомбинации. Интеграция фрагментов экзогенной ДНК с использованием механизма гомологичной рекомбинации 26
1.5.2. Негомологичное объединение концов молекулы ДНК. Захват фрагментов ДНК 31
1.6. ДЦР как индукторы репарационно-рекомбинационных процессов в
соматической клетке 33
1.6.1. Опознание повреждения и активация систем трансдуцирующих киназ 33
1.6.2. Функциональные ДЦР 35
1.6.2.1. Перетасовка генов иммуноглобулинов и генов TCR 35
1.6.2.2. Реорганизация генома стволовых клеток, вступающих на путь дифференцировки 36
1.6.3. ДЦР, индуцированные внешним воздействием. Действие химиотерапии и облучения на систему кроветворения 38
1.6.3.1. Основные характеристики системы кроветворения млекопитающих 39
1.6.3.2. Угнетение системы кроветворения облучением 41
1.6.3.3. Метаболизм ЦФ в организме. Действие на систему кроветворения 43
1.6.3.4. Репарация возникших повреждений после облучения 45
1.6.3.5. Репарация повреждений после воздействия ЦФ 47
ГЛАВА 2. Материалы и методы 55
2.1. Препарат ДНК человека 55
2.2. Приготовление меченой ДНК 55
2.3. Культура клеток. Обработка клеток меченой ДНК 55
2.4. Выделение ДНК 56
2.4.1. Выделение ДНК клеточных компартментов 56
2.4.2. Метод заливки ядер в блоки легкоплавкой агарозы 57
2.4.3. Выделение ДНК из органов мышей 57
2.5. Приготовление препаратов ядер клеток костного мозга 58
2.6. ПЦР на предметных стеклах 58
2.7. Полимеразная цепная реакция 60
2.8. Электрофорез в агарозном геле 61
2.9. Секвенирование ПЦР фрагментов ...61
2.10. Саузерн-блот гибридизации 62
2.11. Эксперименты с мышами 62
2.11.1. Схемы введения мышам препаратов в экспериментах по радиопротекции 62
2.11.2. Введение мышам ЦФ и ДНК человека 63
2.11.3. Введение мышам ДНК 64
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 65
3.1. Радиопротекторное действие экзогенной фрагментированной ДНК 65
3.2. Воздействие кросслинкирующего цитостатика ЦФ и экзогенной ДНК на организм мышей 70
3.2.1. Влияние фрагментированной ДНК на выживаемость мышей после введения ЦФ 70
3.2.2. Поглощение экзогенной ДНК стволовыми клетками 75
3.2.2.1. Проникновение экзогенной ДНК в ядерное пространство эмбриональных стволовых клеток человека 75
3.2.2.2. Поглощение экзогенной ДНК клетками костного мозга мыши 80
3.2.3. Выявление фрагментов ДНК человека во фракции геномной ДНК экспериментальных животных после воздействия ЦФ и ДНК 83
3.2.3.1. ПЦР анализ геномной ДНК экспериментальных животных 83
3.2.3.2. Сравнительный Саузерн-блот анализ геномной ДНК экспериментальных животных 88
3.2.4. Возможные события, определяющие появление последовательностей ДНК человека во фракции геномной ДНК экспериментальных животных 93
Заключение 98
Выводы 101
Список литературы 102
