Введение
II. Обзор литературы 9
II.1 . Гибернация млекопитающих 9
II.2. Регуляция энергетического метаболизма при гибернации 12
II.З. Регуляция экспрессии генов 15
II.4. Контроль метаболизма посредством влияния температуры на свойства ферментов 17
II.5. Регуляция функциональной активности сердца и скелетных мышц при гибернации 18
II.6. Основные белковые и липидные компоненты мембран СР 22
II.7 . Регуляция функциональной активности СР 34
II.8. Особенности функционирования СР животных-гибернаторов 49
III. Цели и задачи 55
IV. Материалы и методы 56
IV. 1. Экспериментальные животные 56
IV. 2 . Получение микросомального препарата СР 56
IV. 3. Определение концентрации белка 57
IV 4. Определение активности Са-АТРазы 57
IV 5. Определение влияния фосфорилирования белков СР на активность Са-АТРазы СР 58
IV. 6. Электрофорез в полиакриламидном геле 58
IV 7. Фосфорилирование белков СР эндогенными протеинкиназами 59
IV 8. Определение уровня фосфорилирования белков СР 60
IV.9. Авторадиография 60
IV 10. Очистка препарата Са-АТРазы аффинной хроматографией на колонке с Reactive RED-120 агарозой 61
IV 11.Анализ спектра белков, взаимодействующих с Са-АТРазой 61
IV12. Идентификация белков, взаимодействующих с Са-АТРазой. 62
IV13. Определение консервативных аминокислотных последовательностейи потенциальных участков фосфорилирования в белках, 1 взаимодействующих с Са-АТРазой 63
IV. 12. Материалы 64
V. Результаты и обсуждение 65
V.l. Характеристика мембранных препаратов СР скелетных мышц , используемых в работе 65
1.1 Выход белка СР и активность Са-АТРазы 65
1.2 Белковый состав исследуемых препаратов СР 66
V.2. Определение оптимальных условий фосфорилирования белков в препаратах СР эндогенными протеинкиназами 67
V.3. Анализ включения фосфата в белки препаратов СР скелетных мышц суслика 70
3.1 Белки-мишени эндогенных протеинкиназ в мембранах СР 70
3.2 Фосфорилирование белков СР в присутствии активаторов эндогенных протеинкиназ 72
3.3 Анализ локализации протеинкиназ в препаратах СР 76
3.4 Анализ спектра протеинкиназ, присутствующих в препаратах СР 77
V.4. Влияние фосфорилирования белков СР эндогенными протеиникназами на активнось Са-АТРазы 79
V.5. Определение роли казеинкиназы//в фосфорилировании белков СР скелетных мышц сусликов. ~~ 80
V.6. Выявление белков, взаимодействующих с Са-АТРазой 83
V.7. Идентификация белков - мишеней казеинкиназы II, связывающихся с Са-АТРазой. 85
VI. Заключение ^
VII. Выводы *&
VIII. Список литературы 8SP
