Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Сигнальные пути Wnt и их взаимодействие. 13
1.2. Экспрессия белков Wnt в период постнатального развития 16
1.3. СП Wnt в регуляции поведения 18
1.4. Участие СП Wnt в патогенезе нейродегенеративных заболеваний и психических расстройств. 20
1.5. СП Wnt в регуляции пластичности синаптической передачи 23
1.6. Роль белков СП Wnt в пре- и постсинаптических процессах 25
1.7. Заключение 27
ГЛАВА 2. Методы исследования 29
2.1. Схема эксперимента 29
2.2. Создание лентивирусных конструкций 30
2.3. Инъекции лентивирусных конструкций 31
2.4. Электрофизиологическое исследование на наркотизированных животных in vivo
2.4.1. Вживление электродов 31
2.4.2. Электрофизиологический эксперимент 31
2.4.3. Обработка результатов 32
2.5. Биохимический анализ изменений СП Wnt в гиппокампе 33
2.5.1. Изъятие гиппокампов 33
2.5.2. Гомогенизация 33
2.5.3. Оценка количества белка 34
2.5.4. Электрофорез белков в полиакриламидном геле 34
2.5.5. Вестерн блоттинг 34
2.5.6. Иммуноферментный анализ (ИФА) 35
2.5.7. Обработка результатов. 36
2.6. Определение киназной активности GSK-3. 37
2.7. Оценка распространения лентивирусных конструкций в гиппокампе.
2.7.1. Изготовление срезов гиппокампа 38
2.7.2. Иммуногистохимический анализ 38
ГЛАВА 3. Результаты исследования 39
3.1. Распространение лентивирусной конструкции в гиппокампе и эффективность заражения. 39
3.2. Влияние хронического подавления и усиления СП Wnt на синаптическую пластичность. 3.2.1. Сравнение контрольных групп 43
3.2.2. Динамика изменения долговременной потенциации in vivo в результате хронического подавления СП Wnt . 45
3.2.3. Динамика изменения долговременной потенциации in vivo в результате хронического усиления СП Wnt 47
3.2.4. Заключение 49
3.3. Пресинаптические изменения в результате хронического подавления и усиления СП Wnt. 50
3.3.1. Сравнение контрольных групп 50
3.3.2. Динамика изменения коэффициента ПФ в результате лентивирусной трансдукции. 51
3.3.3. Изменения исходного коэффициента ПФ (до тетанизации) в результате лентивирусной трансдукции 52
3.3.4. Зависимость амплитуды ДП от исходного коэффициента ПФ 53
3.3.5. Заключение 3.4. Постсинаптические изменения в результате хронического подавления и усиления СП Wnt. 55
3.5. Изменение экспрессии белков СП Wnt в гомогенатах гиппокампа через 14 дней после лентивирусной трансдукции. 56
3.5.1. Сравнение контрольных групп. 57
3.5.2. Изменения уровня -катенина в результате хронического подавления и усиления СП Wnt 59
3.5.3. Изменения уровней Циклина D1 и c-Myc в результате хронического подавления и усиления СП Wnt. 61
3.5.4. Изменения уровня экспрессии и активности GSK-3 в результате хронического подавления и усиления СП Wnt 63
3.5.5. Изменения уровней экспрессии -катенина, GSK-3 и их фосфорилированных форм в ядерных фракциях гомогенатов гиппокампа 65
3.5.6. Заключение 68
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 70
4.1. Пресинаптические механизмы нарушения ДП in vivo при хроническом подавлении СП Wnt 70
4.2. Постсинаптические механизмы увеличения амплитуды ДП in vivo на фоне хронической оверэкспрессии Wnt3 72
4.3. Роль -катенина в реализации влияния СП Wnt на синаптическую пластичность 73
4.4. Участие целевых белков СП Wnt в реализации влияния подавления и усиления каскада на синаптическую пластичность 75
4.5. Роль GSK-3 в регуляции синаптической пластичности посредством лентивирусного подавления и усиления СП Wnt 76
Заключение 80
Выводы 82
Благодарности 83
Список литературы 84
