Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Ферменты биотрансформации ксенобиотиков 12
1.2. Суперсемейство цитохромов Р450 13
1.2.1. Подсемейство CYP1А 16
1.2.2. Подсемейство СYP2B 21
1.2.3. Подсемейство CYP2C 22
1.3. НАДФН-цитохром Р450 редуктаза 22
1.4. Глутатион-Б-трансферазы 24
1.5. Механизмы регуляции экспрессии генов цитохромов Р450 27
1.5.1. Регуляция экспрессии генов CYP1A 29
1.5.2. Регуляция экспрессии генов CYP2B 42
1.5.3. Регуляция экспрессии генов CYP2C 46
1.6. Витамин Е ( а-токоферол) 47
1.6.1. Метаболизм витамина Е 49
1.6.2. Функции витамина Е 51
1.6.3. а-токоферол и цитохромы Р450 53
1.7. Витамин К (менадион) 55
1.7.1. Метаболизм витамина К 57
1.7.2. Функции витамина К 58
1.7.3. Витамины К и цитохромы Р450 60
ГЛАВА 2. Материал и методы 62
2.1. Материалы 62
2.2. Животные 62
2.3. Методы исследования. 63
2.3.1. Выделение микросом и цитозолей печени крыс 63
2.3.2. Определение количества белка в микросомах и цитозолях 64
2.3.3. Определение количества цитохромов Ь5 и Р450 в микросомах печени крыс 64
2.3.4. Определение активности НАДФН-цитохром Р450редуктазы 64
2.3.5. Определение активности глутатион-Б-трансферазы в цитозоле печени крыс 64
2.3.6. Определение активностей CYP1A1, CYP1A2, CYP2B и CYP2C в микросомах печени крыс 65
2.3.7. Количественное определение малонового диалъдегида 65
2.3.8. Определение токоферолов в микросомах печени крыс 66
2.3.9. Диск -электрофорез белков в денатурирующем полиакриламидном геле 66
2.3.10. Полусухой электроперенос беков на нитроцеллюлозную мембрану 66
2.3.11. Иммунохимический анализ белков микросом 67
2.3.12. Выделение суммарной РНК из клеток печени крыс 68
2.3.13. Электрофорез РНК в частично денатурирующих условиях 69
2.3.14. Определение концентрации РНК 70
2.3.15. Определение уровня мРНК CYP1A1, CYP1A2, AhRuArnt 70
2.3.16. Выделение экстракта ядер клеток печени 73
2.3.17. Определение белка в экстрактах ядер 74
2.3.18. Приготовление зонда для ДНК/белкового связывания 74
2.3.19. Анализ ДНК/белковых комплексов 75
2.3.20. Исследование действия неферментного перекисного окисления липидов на активность CYP1A1 75
2.3.21. Исследование действия а-токоферола и менадиона на активность CYP1A1 in vitro 76
2.4. Статистическая обработка 76
ГЛАВА 3. Результаты 77
3.1. Исследование активностей ферментов биотрансформации ксенобиотиков печени крыс и характеристик перекисного окисления липидов in vivo 77
3.1.1. Влияние а-токоферола на ферменты биотрансформации ксенобиотиков и процессы перекисного окисления липидов 77
3.1.2. Влияние менадиона на ферменты биотрансформации ксенобиотиков и процессы перекисного окисления липидов 82
3.2. Исследование механизмов, лежащих в основе индукции активности CYP1A под действием менадиона и а-токоферола 87
3.3. Исследование способности а-токоферола и менадиона активировать AhR 91
3.4. Влияние а-токоферола и менадиона при совместном введении с бензо(а)пиреном in vivo на экспрессию генов CYP1A и процессы перекисного окисления липидов в печени крыс 94
3.5. Влияние менадиона и а-токоферола на активность CYP1A1 микросом печени крыс, индуцированных бензо(а)пиреном in vitro 99
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 103
4.1. Индуцирующий эффект а-токоферола на активности ферментов биотрансформации ксенобиотиков печени интактных крыс и механизмы, лежащие в основе индукции CYP1A 103
4.2. Индуцирующий эффект менадиона на активности ферментов биотрансформации ксенобиотиков печени интактных крыс и механизмы, , лежащие в основе индукции CYP1A
4.3. Индуцибельность CYP1А 107
4.4. Возможные механизмы индукции СYP2B1, CYP2C, НАДФН-цитохром Р450 редуктазы и глутатион-Б-трансферазы 109
4.5. Ингибирующие эффекты а-токоферола и менадиона на индуцируемые бензо(а)пиреном активности CYP1A и механизмы, лежащие в их основе... 110
Выводы 115
Список литературы 116
