Введение
Обзор литературы
Основные характеристики мультипотентных мезенхимных стромальных клеток (МСК)
История исследования малодифференцированных стромальных предшественников взрослого организма
Критерии МСК
Тканевые источники МСК .
МСК из жировой ткани .
Участие МСК в регенеративных процессах .
МСК в клеточной терапии и регенеративной медицине
Содержание кислорода как фактор микроокружения МСК .
Молекулярный механизм ответа МСК на пониженную концентрацию О2
Изменение свойств МСК при гипоксических значениях концентрации О2 .
Морфология и иммунофенотип .
Жизнеспособность и метаболизм
Пролиферация .
Дифференцировка/пластичность
Миграция в зону повреждения
Иммуномодуляторные свойства МСК
Воздействие МСК на иммунной системы: клеточные компоненты
Т-лимфоциты Натуральные киллеры (НК) Дендритные клетки (ДК) В-лимфоциты Механизм реализации иммуносупрессивных свойств МСК Влияние О2 на иммуномодуляторные свойства МСК Влияние иммунных клеток на МСК Иммуномодуляция Жизнеспособность Морфология и иммунофенотип .
Пролиферация 48
Миграция 49
Дифференцировка 49
Материалы и методы исследования 54
Химические реагенты 54
Антитела 54
Материалы и оборудование 55
Среды для культивирования клеток 56
Выделение МСК 57
Культивирование МСК 57
Пассирование МСК 57
Криоконсервация МСК 58
Размораживание МСК 58
Выделение МНК 58
Сокультивирование МСК и МНК 58
Методы исследования 59
Характеристика апоптотического и некротического путей гибели
МСК 59
Пролиферативная активность 60
Дифференцировка в остеогенном направлении 60
Дифференцировка в адипогенном направлении 61
Оценка функционального состояния митохондрий, лизосом, эндоплазматического ретикулума, продукции активных форм кислорода 62
Конфокальная микроскопия 63
Иммуноцитохимический анализ 63
Определение содержания цитокинов в среде культивирования 63
Анализ дифференциальной экспрессии генов 65
Проточная цитофлуориметрия 66
Направленная миграция МСК 66
Ненаправленная миграция МСК 67
Статистическая обработка 67
Результаты экспериментальных исследований 68
Характеристика МСК и МНК в монокультуре при различном уровне кислорода 68
Характеристика монокультуры МНК 72
МСК после взаимодействия с неактивированными МНК 73
3.4 Морфофункциональная характеристика МСК после взаимодействия с ФГА- активированными МНК 75
3.4.1 Жизнеспособность 76
3.4.2 Клеточные органеллы
3.4.2.1 Митохондрии 77
3.4.2.2 Лизосомы 77
3.4.2.3 Эндоплазматический ретикулум 78
3.4.2.4 Продукция АФК
3.4.3 Иммунофенотип 79
3.4.4 Пролиферативная активность 80
3.4.5 Миграционная активность
3.4.5.1 Ненаправленная миграция 82
3.4.5.2 Направленная миграция МСК 83
3.4. Способность к дифференцировке
3.4.6.1 Остеогенная дифференцировка 85
3.4.6.2 Адипогенная дифференцировка
3.4.7 Экспрессия на МСК молекул межклеточных контактов ICAM1 88
3.4.8 Экспрессия молекул главного комплекса гистосовместимости HLA-ABC и HLA-DR 89
3.4.9 Паракринная активность 90
3.4.10 Транскрипционная активность 93
3.5 МСК с исходно высоким и низким уровнем АФК проявляют разные свойства при взаимодействии с МНК 97
3.5.1 Морфология МСК 98
3.5.2 Жизнеспособность МСК 99
3.5.3 Митохондриальная активность МСК 100
3.5.4 Лизосомальная активность МСК 101
3.5.5 Продукция АФК 102
Глава 4. Обсуждение результатов 104
Выводы 118
Список литературы
