Введение
Глава 1. Пространственно-временная картина репликации (обзорлитературы) , 10
1.1. Ориджины репликации 10
1.2. Инициация репликации 11
1.3. Программирование времени инициации репликации 13
1.3.1. Программирование в клеточном цикле 14
1.3.2. Положение в ядре играет важную роль в программировании ориджинов 14
1.3.3. Статус ацетилирования гистонов ориджинов определяет время инициации репликации 16
1.3.4. У S. cerevisiae существует несколько независимых механизмов программирования позднего включения ориджинов 17
1.3.5. Участие ORC в определении временной программы репликации 19
1.4. Эффективность ориджинов репликации 19
1.5. Фокусы репликации . 20
1.6. Скорость репликации 22
1.7. Время репликации отдельных участков генома 24
1.8. О связи транскрипции и репликации 27
1.9. Значение точной временной последовательности репликации генома 30
1.10. Пространственно-временная картина репликации в политенных тканях D,
melanogaster 32
1.10.1. Эндоцикл 34
1.10.2. Репликация политенных хромосом слюнных желез 36
1.11. Белок SUUR специфически контролирует недорепли кацию вСЖ 39
Глава 2 Материалы и методы 43
2.1. Условия проведения опытов 43
2.2. Линии D. melanogaster 43
2.3. Приготовление давленых препаратов слюнных желез 45
2.4. Приготовление препаратов политенных хромосом для гибридизации in situAS
2.5. Процедура гибридизации in situ 45
2.6. Приготовление препаратов для иммуноокрашивания политенных хромосом 46
2-7. Иммуноокрашивание политенных хромосом 46
2.8. Анализ препаратов 47
2.9. Детекция апоптоза... 48
2.10. EMS мутагенез 48
2.11. Получение трансгенных мух 49
2.12. Вестерн-блот анализ 49
Глава 3. Результаты 51
ЗЛ.Цитогенетический анализ прицентромерного района политенной X- хромосомы 51
3.1.1 .Морфология района 20 51
3.1.2. Построение карты района 20 в линиях, несущих мутацию SuUR и цитологический анализ границ инверсий, разрывающих прицентромерный гетерохроматин Х-хромосомы 51
3.1.3. Локализация генетических маркеров 56
3.2. Фенотипы, вызванные эктопической экспрессией SUUR 58
3.2.1. Эктопическая экспрессия SUUR ингибирует политенизацию в слюнных железах . 60
3.2.2. Повсеместная экспрессия SUUR ингибирует личиночный рост и приводит к летальности 61
3.2.3. Влияние эктопической экспрессии SUUR на диплоидные ткани 61
3.2.3.2. Экспрессия в крыловом имагинальном диске 61
3.2.3.3.Экспрессия в других тканях 64
3.3. Создание линий, экспрессирующих укороченные формы белка SUUR 65
3.3.1.Мутагенез, направленный на получение мутаций в трансгене \JAS-SuUR65
3.3.2. Анализ мутаций в трансгене 66
3.3.3, ^-элементные конструкции на основе С-концевой части SUUR 68
3.4. Анализ функциональной значимости отдельных участков SUUR 69
3,4.1 Фенотипы эктопической экспрессии фрагментов SUUR 69
3.4.2. Связывание фрагментов SUUR с хромосомами СЖ 72
3.4.3. Фрагменты SUUR специфично узнают районы ИГХ 77
3.4.4.Влияние эктопической экспрессии N-концевых фрагментов SUUR на эндогенный SUUR 81
3.4.5. Влияние фрагментов SUUR на недорепликацию в политенных хромосомах СЖ . 86
3.4.6.Фрагменты SUUR вызывают реорганизацию структуры политенных хромосом..,. 87
Слипание дисков политенных хромосом 93
Влияние на пуфы 95
3,4.7.Влияния эктопической экспрессии фрагментов SUUR на распределение НР1 на политенных хромосомах СЖ 96
3.4.7.1 .Оверэкспрессия SUUR вызывает перераспределение НР1 на хромосомах 96
3.4.7.2.Исследование влияния эктопической экспрессии фрагментов SUUR на распределение НР1 на политенных хромосомах СЖ 97
3,4.8.Исследование взаимодействия эктопически экспрессированных фрагментов с избыточным полноразмерным SUUR 98
Глава 4 Обсуждение 101
4.1. Влияние мутации SuUR на прицентромерный район политенной X-хромосомы . 101
4.2. Использование системы GAL4-UAS для исследования функционального значения гена SuUR 104
4.3. Использование доминантных фенотипов в системе GAL4-UAS, для получения функциональных мутаций в трансгене UAS-SuUR 107
4.4. Анализ функциональных участков SUUR 109
4.4.1.Влияние на репликацию 109
4.4.2.Связывание с хромосомами 109
4.4,3. Самоагрегация , 112
4.4.4.Влияние на структуру хромосом 113
Выводы 116
Список литературы
