Введение
ГЛАВА 1 Обзор литературы
1.1 Гетерогенность опухолевых клеток in vitro и in vivo, определяемая методом SP 23
1.2 Характерные особенности клеток SP при культивировании в разных условиях и их связь со свойствами опухолевых стволовых клеток 26
1.3 Чувствительность клеток SP к редко- и плотноионизирующему излучению 31
1.4 Химиорезистентность клеток SP 37
1.5 Механизмы радио- и химиорезистентности клеток SP 42
ГЛАВА 2 Материалы и методы
2.1 Культивирование клеток меланомы В16 и рака молочной железы MCF-7 in vitro 52
2.2 Идентификация и определение количества клеток SP в изучаемых культурах с помощью проточной цитофлуориметрии 52
2.3 Сортировка клеток по способности исключать флуоресцентный краситель Но342 56
2-4 Методы сравнительного исследования клеток SP и NSP 57
2 д і Определение клоногенной способности клеток изучаемых популяций з
2.4.2 Анализ клеточного цикла в отсортированных популяциях 58
2.4.3 Определение внутриклеточного содержания оксида азота в изучаемых популяциях опухолевых клеток 59
2.4.4 Исследование экспрессии поверхностных маркеров в клетках SP и NSP аденокарциномы молочной железы линии MCF-7 60
2.4.5 Определение двунитевых повреждений ДНК в клетках изучаемых популяций меланомы линии В16 62
2.4.6 Анализ содержания БТШ27 и БТШ70 в клетках SP и NSP линии MCF-7 63
Облучение клеток, источники ионизирующих излучений 65
Обработка клеточных культур противоопухолевыми препаратами 69
Статистический анализ полученных результатов 70
Результаты исследования
Количественная оценка и характеристика клеток SP в контроле по экспрессии поверхностных маркеров CD44 и
CD24 в сравнении с остальной массой клеток 71
Изменение количества клеток SP меланомы В16 и рака молочной железы MCF-7 под действием у-излучения в разных дозах 73
Сравнительный анализ чувствительности клеток изучаемых популяций к действию редко- и плотноионизирующего излучений на примере меланомы В16 76
Влияние гамма- и нейтронного излучения на репродуктивную выживаемость клеток SP и NSP линии MCF-7 77
Влияние противоопухолевых препаратов на субпопуляционный состав клеточных культур 79
3.5.1 Изменение количества клеток SP меланомы В16 и аденокарциномы молочной железы MCF-7 под действием метотрексата 79
3.5.2 Изменение относительного и абсолютного количества клеток SP линии MCF-7 после инкубации с цисплатином и салиномицином 82
Механизмы высокой резистентности клеток SP к действию редкоионизирующего излучения по сравнению с остальной массой клеток 86
3.6.1 Распределение клеток изучаемых популяций по фазам клеточного цикла 86
3.6.2 Сравнительная оценка спонтанных и радиационно-индуцированных двунитевых повреждений ДНК по количеству фокусов уН2АХ в клетках SPHNSP 89
3.6.3 Содержание оксида азота (II) в клетках сравниваемых популяций 91
3.6.4 Конститутивный и радиационно-индуцированный уровень БТШ27 и БТШ70 в изучаемых популяциях клеток 93
ГЛАВА 4 Обсуждение результатов
4.1 Метод SP и возможность идентификации с его помощью фракции, обогащенной опухолевыми стволовыми клетками 96
4.2 Закономерности действия ионизирующего излучения разного качества на клетки SP 97
4.3 Молекулярно-клеточные механизмы резистентности SP и других популяций, экспрессирующих маркеры опухолевых стволовых клеток, к действию редкоионизирующего излучения 100
4-4 Высокая химиорезистентность клеток SP и других популяций, выявляемых по экспрессии маркеров опухолевых
стволовых клеток 104
Заключение 106
Выводы
Список сокращений и условных обозначений 112
Список литературы
