Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Свойства и роль гистамина и ссротонина в биологических объектах 13
1.1.1. Физико-химические свойства и способы получения гистамина и серотонина 13
1.1.2. Гистамин и серотонин в живых организмах 14
1.1.3. Гистамин как индикатор качества продуктов питания 18
1.1.4. Сопутствующие аминокислоты и биогенные амины 19
1.2. Методы определения гистамина и серотонина 20
1.2.1. Биологические и биохимические методы 20
1.2.2. Химические методы 22
1.2.3. Прочие методы 56
Глава 2. Экспериментальная часть 58
2.1. Реактивы 58
2.2. Аппаратура и техника измерений 62
2.3. Методики измерений и расчетов 63
2.3.1. Расчёт предела обнаружения аминов 63
2.3.2. Методика хроматографирования 64
2.3.3. Проведение измерений поляризации флуоресценции 66
2.3.4. Расчет аналитических характеристик метода ПФИА 69
Глава 3. Флуориметрическое определение гистамина 74
3.1. Флуориметрическое определение гистамина с ОФА 74
3.1.1. Условия взаимодействия гистамина с ОФА, влияние ПАВ 74
3.1.2. Условия проведения реакции аминов с ОФА в присутствии различных нуклеофильных агентов, влияние ПАВ 83
3.2 Флуориметрическое определение гистамина с флуорескамином 95
3.2.1. Выбор оптимальных условий проведения реакции 95
3.2.2. Влияние ПАВ 100
3.2.3. Влияние ЦЦ 102
3.2.4. Градуировочные графики 102
Глава 4. Флуориметрическое определение серотонина 107
4.1. Флуориметрическое определение серотонина по собственной флуоресценции 107
4.1.1. Выбор оптимальных условий определения серотонина по собственной флуоресценции 107
4.1.2. Влияние ПАВ 110
4.1.3. Градуировочные графики 112
4.2. Флуориметрическое определение серотонина с ОФА 113
4.2.1. Выбор оптимальных условий взаимодействия серотонина с ОФА 113
4.2.2. Влияние ПАВ 117
4.2.3. Градуировочные графики 118
4.3. Флуориметрическое определение серотонина с флуорескамином 119
4.3.1. Выбор оптимальных условий взаимодействия серотонина с флуорескамином 120
4.3.2. Влияние организованных сред 123
4.3.3. Градуировочные графики 124
Глава 5. Разработка методик определения аминов методом пфиа 128
5.1. Получение иммунореагентов и оптимизация условий определения аминов методом ПФИА 129
5.1.1. Синтез конъюгатов гистамина и серотонина с белками 129
5.1.2. Синтез флуоресцеин-меченных антигенов (трейсеров) 130
5.2. Разработка метода ПФИА для определения гистамина 133
5.2.1. Иммунореагенты для определения гистамина 133
5.2.2. Титрование антител (определение степени связывания антител антигеном) 134
5.2.3. Градуировочные графики 137
5.3. Разработка метода ПФИА для определения серотонина 139
5.3.1. Иммунореагенты для определения серотонина 139
5.3.2. Титрование антител (определение степени связывания антител антигеном) 139
5.3.3. Градуировочный график 140
5.4. Разработка метода ПФИА для определения эфедрина 141
5.4.1. Синтез иммунореагентов 141
5.4.2. Определение степени связывания (титрование) антител 143
5.4.3. Градуировочный график 143
5.5. Разработка метода ПФИА для определения имазалила 145
5.5.1. Определение степени связывания антител (кривые титрования) 145
5.5.2. Градуировочный график 146
Глава 6. Пробоподготовка биообъектов и методики определения гистамина и серотонина 150
6.1. Разделение и количественное определение гистамина и серотонина методом тонкослойной хроматографии 150
6.1 1. Выбор оптимальных условий хроматографирования 150
6.2. Практическое использование организованных сред для определения гистамина и серотонина 158
6.2.1. Флуориметрическое определение гистамина в пищевых продуктах 158
6.2.2. Флуориметрическое определение гистамина и серотонина в моче 158
Выводы 165
Список Литературы 167
Приложение 213
