Введение
I. Обзор литературы 9
1. Генетическая связь между фототрофными и другими грамотрицательными бактериями 9
2. Биосинтез липополисахаридов 12
2.1. Структура и биосинтез липида А 13
2.1.1. Регуляторные пути для модификации липида А 15
2.2. Структура и биосинтез олигосахаридов кора 17
2.2.1. Хемотипы бактерий 20
2.2.2. Роль кора в стабильности внешней мембраны: глубокий R-хемотип 22
2.3. Структура и биосинтез О-антигена 23
2.3.1. Транспорт ЛПС из внутренней во внешнюю мембрану 25
2.3.2. Серотипы бактерий 26
3. Электроповерхностные свойства грамотрицательных бактерий 26
4. Высвобождение липополисахаридов из клеточной стенки бактерий 28
4.1. Участие белков плазмы крови в высвобождении ЛПС из клеточной стенки бактерий 29
II. Материалы и методы исследования 36
Материалы 36
Объекты исследований. 36
1. Культивирование клеток 36
1.1. Культура клеток Rb. capsulatus 36
1.2. Культура клетокЕ, coli 37
2. Метод агглютинации клеток по Линдбергу 37
3. Регистрация спектров поглощения клеток Rb. capsulatus 38
4. Иммунная электронная микроскопия клеток Rb. capsulatus PG 38
5. Определение электрофоретической подвижности клеток (ЭФП) 38
6. Выделение липополисахаридов из биомассы бактерий и определение их качественного состава 39
6.1. Получение ЛПС из клеток Rb. capsulatus 39
6.2. Получение полисахаридного фрагмента из ЛПС Rb. capsulatus методом гидролиза 40
6.3. Получение ЛПС из клеток Е. coli 40
6.4. Определение чистоты препаратов ЛПС 41
6.5. Определение качественного состава ЛПС методом электрофореза 41
7. Получение антител против ЛПС и ПС из Rb. capsulatus PG 42
8. Иммунно-ферментный анализ определения ЛПС 42
9. Колориметрический метод определения ЛПС с карбоцианшювым красителем 43
10. Определение содержания КДО в препаратах ЛПС по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой 44
11. Инкубация клеток Rb. capsulatus PG и Е. coli различных хемотипов с белками плазмы крови 45
12. Определение количества колониеобразуїощих единиц у клеток Е. coli после инкубации с белками плазмы крови 46
III. Результаты и их обсуждение 47
1. Определение хемотипа бактерий Rb. capsulatus В10 и Rb. capsulatus PG 48
1.1. Характеристика ЛПС из разных штаммов Rb. capsulatus 50
1.1.1. Изучение возможностей применения колориметрического метода для определения ЛПС различной структуры 50
1.1.2. Сравнительный анализ содержания КДО в препаратах ЛПС из разных штаммов Rb. capsulatus 53
1.1.3. Сравнительный анализ состава ЛПС различных штаммов Rb. capsulatus методом электрофореза в полиакриламидном геле 55
2. Исследование электроповерхностных свойств клеток Rb. capsulatus VLE. сой различных хемотипов 56
3. Исследование влияния факторов роста на состав ЛПС клеток Rb. capsulatus PG 64
4. Влияние хемотипа бактерий на высвобождение ЛПС из клеточной стенки Rb. capsulatus PG и Е. coli под действием различных белков плазмы крови 72
Выводы 77
Список литературы 78
