Введение
ГЛАВА 1. Стволовые клетки, их свойства, источники получения и роль в регенеративной медицине (обзор литературы) .19
1.1. Свойства и фенотип гемопоэтических стволовых клеток 19
1.2. Поиск оптимального источника ГСК 27
1.3. Плацента как источник гемопоэтических стволовых клеток 28
1.4. Плацента как источник негемопоэтических стволовых и прогениторных клеток 32
1.5. Способы выделения ГСК 34
1.6. Выбор оптимальной терапевтической дозы ГСК 36
1.7. Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки: общая характеристика .37
1.8.Основные поверхностные маркеры ММСК 38
1.9. Пластичность ММСК 40
1.10. Применение ММСК в эксперименте и в клинике 42
1.11. Перспективные направления развития регенеративной медицины 49
1.12. Заключение и задачи исследования .55
ГЛАВА 2. Методические вопросы исследования 57
2.1. Общая характеристика лабораторных животных, использованных в исследованиях 57
2.2. Экспериментальное планирование беременности 60
2.3. Выделение мононуклеарной фракции клеток из плодной части плаценты .61
2.4. Культивирование и субкультивирование ММСК 63
2.5. Идентификация ММСК 65
2.5.1. Дифференцировка в остеогенном направлении 65
2.5.2. Дифференцировка в адипоцитарном направлении 68
2.5.3. Идентификация ММСК иммуноцитохимическим методом 69
2.6. Морфологический анализ культур клеток 72
2.7. Выделение ГСК методом прямой иммуномагнитной сепарации 72
2.7.1. Методика SCA-1 позитивной иммуномагнитной сепарации 72
2.7.2. Методика СD 117 позитивной иммуномагнитной сепарации 73
2.8. Иммунофенотипирование ГСК 74
2.9. Подсчет и определение жизнеспособности клеток 79
2.10. Тест колониеобразования 81
2.11. Облучение лабораторных животных на гамма-терапевтической установке 85
2.12. Методы исследования кроветворной ткани 87
2.12.1. Морфологическое исследование крови и костного мозга 87
2.12.2. Морфологическое исследование селезенки 90
2.12.2.1. Исследование клеточного состава селезенки 90
2.12.2.2. Определение основных морфометрических показателей селезенки 91
2.13. Методы оценки регенераторных процессов в слизистой оболочке тощей кишки 92
2.14. Методы статистической обработки полученных результатов 99
ГЛАВА 3. Изучение влияния различных доз гск при проведении сочетанной трансплантации с ммск на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных в физиологических условиях и в условиях воздействия экстремальных факторов 101
3.1. Влияние ГСК в количестве 250 тыс. клеток/кг при проведении сочетанной трансплантации с ММСК на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных на 7 сутки в физиологических условиях 101
3.2. Влияние ГСК в количестве 250 тыс. клеток/кг при проведении сочетанной трансплантации с ММСК на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных на 7 сутки после воздействия ионизирующего излучения 105
3.3. Влияние ГСК в количестве 250 тыс. клеток/кг при проведении сочетанной трансплантации с ММСК на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных на 5 сутки после острой кровопотери 108
3.4. Влияние ГСК в количестве 300 тыс. клеток/кг при проведении сочетанной трансплантации с ММСК на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных на 7 сутки в физиологических условиях 112
3.5. Влияние ГСК в количестве 300 тыс. клеток/кг при проведении сочетанной трансплантации с ММСК на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных на 7 сутки в условиях воздействия ионизирующего излучения .114
3.6. Влияние ГСК в количестве 300 тыс. клеток/кг при проведении сочетанной трансплантации с ММСК на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных на 5 сутки после острой кровопотери 116
3.7. Влияние ГСК в количестве 330 тыс. клеток/кг при проведении сочетанной трансплантации с ММСК на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных на 7 сутки в физиологических условиях 118
3.8. Влияние ГСК в количестве 330 тыс. клеток/кг при проведении сочетанной трансплантации с ММСК на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных на 7 сутки после воздействия ионизирующего излучения 120
3.9. Влияние ГСК в количестве 330 тыс. клеток/кг при проведении сочетанной трансплантации с ММСК на регенерацию миелоидной ткани зрелых лабораторных животных после острой кровопотери... 123
3.10. Заключение 136
ГЛАВА 4. Влияние сочетанной трансплантации плацентарных ммск и гск на регенерацию миелоидной ткани зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях и в условиях воздействия экстремальных факторов 131
4.1. Состояние миелоидной ткани зрелых и старых лабораторных животных на 1 сутки после сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК в физиологических условиях .131
4.2. Состояние миелоидной ткани зрелых и старых лабораторных животных на 1 сутки после воздействия ионизирующего излучения на фоне сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК .135
4.3. Состояние миелоидной ткани зрелых и старых лабораторных животных на 7 сутки после сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК в физиологических условиях .140
4.4. Состояние миелоидной ткани зрелых и старых лабораторных животных на 7 сутки после воздействия ионизирующего излучения на фоне сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК .145
4.5. Состояние миелоидной ткани зрелых и старых лабораторных животных на 5 сутки после сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК в физиологических условиях 150
4.6. Состояние миелоидной ткани зрелых и старых лабораторных животных на 5 сутки после острой кровопотери на фоне сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК 155
4.7. Заключение 162
ГЛАВА 5. Влияние сочетанной трансплантации плацентарных ммск и гск на регенерацию красной и белой пульпы селезенки зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях и в условиях воздействия экстремальных факторов 170
5.1. Морфометрические и цитологические показатели селезенки зрелых и старых лабораторных животных на 1 сутки после сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК в физиологических условиях 170
5.2. Морфометрические и цитологические показатели селезенки зрелых и старых лабораторных животных на 1 сутки после воздействия ионизирующего излучения дозой 4,0 Гр на фоне
сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК 173
5.3. Морфометрические и цитологические показатели селезенки зрелых и старых лабораторных животных на 7 сутки после сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК в физиологических условиях 177
5.4. Морфометрические и цитологические показатели селезенки зрелых и старых лабораторных животных на 7 сутки после воздействия ионизирующего излучения дозой 4,0 Гр на фоне сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК 180
5.5. Морфометрические и цитологические показатели селезенки зрелых и старых лабораторных животных на 5 сутки после сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК в физиологических условиях .188
5.6. Морфометрические и цитологические показатели регенерации селезенки зрелых и старых лабораторных животных на 5 сутки после острой кровопотери на фоне сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК .190
5.7. Заключение 196
ГЛАВА 6. Влияние сочетанной трансплантации плацентарных ммск и гск на регенерацию эпителия тощей кишки зрелых и старых лабораторных животных в физиологических условиях и в условиях воздействия экстремальных факторов .205
6.1. Состояние регенерации эпителия тощей кишки зрелых и старых лабораторных животных на 1 сутки после сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК в физиологических условиях .205
6.2. Состояние регенерации эпителия тощей кишки зрелых и старых лабораторных животных на 1 сутки после воздействия ионизирующего излучения дозой 4,0 Гр на фоне сочетанной трансплантации
плацентарных ММСК и ГСК 206
6.3. Состояние регенерации эпителия тощей кишки зрелых и старых лабораторных животных на 5 сутки после сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК в физиологических условиях .209
6.4. Состояние регенерации эпителия тощей кишки зрелых и старых лабораторных животных на 7 сутки после сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК в физиологических условиях .210
6.5. Состояние регенерации эпителия тощей кишки зрелых и старых лабораторных животных на 7 сутки после воздействия ИИ дозой 4,0 Гр
на фоне сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК 212
6.6. Состояние регенерации эпителия тощей кишки зрелых и старых лабораторных животных на 5 сутки после острой кровопотери на фоне сочетанной трансплантации плацентарных ММСК и ГСК 215
6.7. Заключение 217
Общее заключение 224
Выводы 241
Список литературы 245
