ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ ...................................................................................................................... 4
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .................................................................................. 15
1.1. Меланома. Эпидемиология и этиология .............................................................. 15
1.2. Современное подходы к терапии меланомы ....................................................... 16
1.3. Истоки формирования понятия клеточного покоя ............................................. 20
1.4. Покоящиеся клетки, их роль в канцерогенезе..................................................... 23
1.5. Влияние цитостатических препаратов на клеточный цикл. Цитостатическое
действие дакарбазина .................................................................................................... 25
1.6. Анализ клеточного цикла ...................................................................................... 29
1.8. β-галактозидаза, ассоциированная со старением ................................................ 32
1.9. Сигнализация в покоящихся клетках меланомы ................................................ 32
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ........................................ 37
2.1. Клеточная линия и условия культивирования .................................................... 37
2.2. Определение концентрации полумаксимального ингибирования
дакарбазина .................................................................................................................... 37
2.3. Воздействие на клетки дакарбазином .................................................................. 38
2.4. Анализ клеточного цикла методом проточной цитометрии .............................. 38
2.5. Иммуноцитохимическое исследование ............................................................... 39
2.6. Детекция стареющих клеток ................................................................................. 41
2.7. Микрочипирование для оценки транскриптомного профиля клеток ............... 42
2.8. Биоинформатический анализ ................................................................................ 43
2.9. ПЦР в реальном времени ....................................................................................... 44
2.10. Анализ клеточной адгезии .................................................................................. 44
2.11. Оценка изменения фосфорилирования белков сигнального каскада митоген-
активируемых протеинкиназ (MAPK) ........................................................................ 46
3
2.12. Статистический анализ ........................................................................................ 47
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ............................... 49
3.1. Концентрация полумаксимального ингибирования дакарбазина ..................... 49
3.2. Изменение динамики клеточного цикла .............................................................. 49
3.3. Детекция стареющих G0-положительных клеток ............................................... 55
3.4. Изменение доли Ki-67-негативных клеток .......................................................... 57
3.5. Транскриптом G0-положительных клеток меланомы кожи SK-MEL-2 ........... 60
3.6. Функциональная роль белков, уровень экспрессии генов которых значительно меняется под действием дакарбазина ......................................................................... 65
3.7. Активация фосфорилирования компонентов сигнального каскада МАРК ..... 71
3.8. Адгезивные свойства G0-положительных клеток ............................................... 73
3.9. Адгезия G0-положительных клеток к компонентам ВКМ ................................. 75
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ................................................................. 78
ВЫВОДЫ ....................................................................................................................... 99
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ .................................. 101
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................................... 106
