Введение
1. Обзор литературы И
1.1. Общие сведения о репродуктивно-респираторном синдроме свиней 11
1.1.1. Основные пути распространения, клинические признаки и патологоанатомические изменения при РРСС 12
1.1.2. Локализация вируса РРСС в организме свиней 15
1.2. Иммунобиологическая характеристика вируса РРСС 17
1.2.1. Классификация, морфология и химический состав 17
1.2.2. Генетическая, антигенная вариабельность и родство штаммов вируса РРСС... 18
1.2.3. Репродукция вируса РРСС in vivo и in vitro 20
1.3. Культуральные свойства вируса РРСС 23
1.3.1. Культивирование вируса РРСС в первичных и перевиваемых культурах клеток 24
1.3.2. Титрование вируса РРСС с использованием различных культур клеток 25
1.4. Методы диагностики РРСС 26
1.4.1. Выделение и идентификация вируса РРСС 26
1.4.2. Серологические методы диагностики РРСС 29
1.5. Иммунитет при РРСС 35
1.5.1. Клеточный иммунитет 36
1.5.2. Гуморальный иммунитет 37
1.6. Вакцины против РРСС 39
1.7. Заключение по обзору литературы 42
2. Собственные исследования 46
2.1. Материалы и методы... 46
2.1.1. Вирусы 46
2.1.2. Культуры клеток 46
2.1.3. Подопытные животные 48
2.1.4. Сыворотки и питательные среды 48
2.1.5. Оборудование, химреактивы, конъюгаты и растворы 49
2.1.6. Культивирование вируса РРСС 53
2.1.7. Определение инфекционного титра вируса РРСС 54
2.1.8. Очистка и инактивация вирусного материала 55
2.1.9. Адъюванты 55
2.1.10. Изготовление вакцины 55
2.1.11. Определение антигенной активности вакцины 56
2.1.12. Заражение животных испытуемым вируссодержащим материалом 57
2.1.13. Постановка серологических реакций 58
2.1.14. Обработка полученных результатов 62
2.2. Результаты собственных исследований 63
2.2.1. Культивирование вируса РРСС в перевиваемой культуре клеток MARC-145 и альвеолярных макрофагах свиней (АМС) 63
2.2.1.1. Культивирование перевиваемой культуры клеток MARC-145 63
2.2.1.2. Особенности репродукции вируса РРСС, штамма Lelystad, в перевиваемой культуре клеток MARC-145 67
2.2.1.3. Изучение особенностей репродукции вируса РРСС, штамма NVSL,
в перевиваемой культуре клеток MARC-145 70
2.2.1.4. Культивирование вируса РРСС в альвеолярных макрофагах свиней 73
2.2.1.5. Изучение иммунобиологических свойств вируса РРСС, штамма Lelystad,
на подсвинках 75
2.2.2. Оптимизация лабораторных методов выделения и обнаружения
вируса РРСС 77
2.2.2.1. Оптимизация непрямой реакции иммунофлюоресценции для выявления антигена вируса РРСС 77
2.2.2.2. Выделение вируса РРСС от экспериментально зараженных животных. 83
2.2.3. Выделение и изучение иммунобиологических свойств полевых изолятов вируса РРСС, циркулирующих среди свинопоголовья на территории России 85
2.2.3.1. Изучение иммунобиологических свойств некоторых изолятов вируса РРСС на поросятах 86
2.2.3.2. Выделение вируса РРСС в АМС 88
2.2.3.3. Выделение вируса РРСС в перевиваемой культуре клеток MARC-145 89
2.2.3.4. Испытание чувствительности к вирусу РРСС различных первичных, перевиваемых культур клеток и куриных эмбрионов 91
2.2.4. Изучение иммунобиологических свойств изолята «Кемеровский-96» вируса РРСС 93
2.2.4.1. Культуральные свойства изолята «Кемеровский-96»
вируса РРСС 93
2.2.4.2. Изучение иммунобиологических свойств изолята «Кемеровский-96» на свиньях 95
2.2.4.3. Контроль изолята «Кемеровский-96» на специфичность и отсутствие контаминации 98
2.2.4.4. Изучение антигенной активности изолята «Кемеровский-96» 99
2.2.5. Оптимизация и модификация методов оценки антигенной
активности вакцин против РРСС 100
2.2.5.1. Оптимизация и модификация реакции нейтрализации (РН)
для выявления антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней и кроликов 101
2.2.5.2. Оптимизация и модификация непрямой реакции
иммунофлюоресценции (НРИФ) для выявления антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней и кроликов 105
2.2.5.3. Оптимизация и модификация реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) для выявления антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней и кроликов 109
2.2.5.4. Оптимизация и модификация непрямого метода иммуноферментного
анализа (ИФА) для выявления антител к вирусу РРСС в сыворотках крови свиней.. 113
3. Обсуждение результатов исследований 120
4. Выводы 126
5. Практические предложения 128
6. Список литературы
