Введение
1. Целлюлоза и р-глюканы 8
2. Компонентный состав и свойства целлюлазных комплексов 10
2.1. Классификация, субстратная специфичность и биохимические свойства целлюлаз 10
2.2. Механизм действия целлюлаз 14
2.3. Доменная структура целлюлаз 19
2.4. Современные представления о классификации гликозил-гидролаз 21
3. Грибные и бактериальные продуценты «нейтральных»целлюлаз 22
4. Применение целлюлаз в текстильной промышлен ности 24
5. Материалы и методы 27
5.1. Ферментные препараты 27
5.2. Субстраты и реактивы 27
5.3. Определение концентрации белка 30
5.4. Хроматографическое разделение ферментов 30
5.5. Определение биохимических характеристик индивидуальных ферментов, титрование белков ферментного комплекса 31
5.6. Методы определения активности ферментов 32
5.6.1. Определение активности по отношению к полисахаридным субстратам 32
5.6.2. Определение активности по полисахаридным субстратам с помощью планшетного метода 32
5.6.3. Определение активности по и-нитрофенильным производным Сахаров 33
5.6.4. Определение активности по «-нитрофенильным производным Сахаров на планшете 34
5.7. Изучение зависимостей активности ферментов от рН и температуры 34
5.8. Изучение термостабильности ферментов 35
5.9. Определение состава низкомолекулярных продуктов гидролиза полимерных субстратов 35
5.10. Адсорбционная способность ферментов 35
5.11. Изучение кинетики гидролиза хлопка и МКЦ 36
5.12. Определение тополитической активности целлюлаз 36
5.13. Оценка влияния целлюлаз на ресорбцию индиго 37
5.14. Масс-спектрометрический анализ пептидов 37
5.15. Методы компьютерного моделирования структуры белка 38
6. Хроматографическое разделение ферментного комплекса с. Lucknowense 39
6.1. Определение компонентного состава ферментного комплекса С. lucknowense 39
6.2. Анализ увеличения экспрессии мультикопированных ферментов 48
7. Выделение и очистка индивидуальных компонентов целлюлазного комплекса с. Lucknowense 57
8. Свойства эндоглюканаз с. Lucknowense 69
8.1. Субстратная специфичность и классификация целлюлаз 69
8.2. Масс-спектрометрический анализ трипсиновых гидролизатов ЭГ 44 к Да и ЭГ 51 кДа 73
8.3. Основные биохимические свойства эндоглюканаз 75
8.4. Кинетические параметры действия выделенных эндоглюканаз 81
8.5. Состав низкомолекулярных продуктов при глубоком гидролизе р-глюкана 82
8.6. Адсорбционная способность целлюлаз. Действие ферментов на МКЦ 83
8.7. Тополитические свойства ферментов 85
8.8. Изучение влияния целлюлаз С. lucknowense наресорбцию индиго 90
9. Молекулярное строение ЭГ IIIИ ЭГ V С. lucknowense 92
9.1. Аминокислотные последовательности ЭГ III и ЭГ V С. lucknowense 92
9.2. Моделирование вторичной и третичной структур ЭГ III и ЭГ V С. lucknowense 100
Выводы 110
