Введение
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Синтез липолитических ферментов микроорганизмами.... 10
1.2. Характеристика свойств микробных липаз
1.2.1. Выделение и очистка препаратов липаз 13
1.2.2. Физико-химические свойства и особенности строения нативных липаз 17
1.2.3. Специфичность действия микробных липаз 24
1.3. Иммобилизация липолитических ферментов 29
1.3.1. Физико-химические свойства иммобилизованных липаз. 34
1.4. Практическое использование липолититческих
ферментов 37
1.5. Заключение 41
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объекты исследований 42
2.2. Методы определения липолитической активности
2.2.1. Определение активности титриметрическим методом 42
2.2.2. Определение активности липазы рН-статным методом... 43
2.3. Методы определения активности сопутствующих ферментов 43
2.4. Метод количественного определения содержания белка... 44
2.5. Получение препаратов липазы различной чистоты 44
2.6. Электрофоретическое исследование препаратов липазы... 46
2.7. Определение молекулярной массы липаз
2.7.1. Метод гель-фильтрации 46
2.7.2. Метод электрофореза в полиакриламидном геле
в присутствии SDS 47
2.8. Изоэлектрическое фокусирование липаз 47
2.9. Определение аминокислотного состава липаз 47
2.10. Модификация липазы специфическими ингибиторами.... 48
2.11. Методы иммобилизации липазы 48
2.12. Инфракрасная спектроскопия препаратов липазы 50
2.13. Определения содержания свободных жирных кислот в маслах в процессе гидролиза 50
2.14. Определение состава фракции свободных жирных кислот в масле 51
2.15. Анализ продуктов гидролиза триглицеридов методами тонкослойной и высокоразрешающей жидкостной хроматографии 52
2.16. Методы исследования клейковины теста из пшеничной муки, пшеничного крахмала 53
2.17. Статистическая обработка результатов 54
ГЛАВА 3.ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ЛИПАЗЫ RH1ZOPUS ORYZAE 1403, ИЗУЧЕНИЕ ИХ ФРАКЦИОННОГО СОСТАВА И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
3.1. Получение технических препаратов липазы 55
3.2. Получение высокоочищенных ферментных препаратов.... 62
3.3. Исследование некоторых физико-химических свойств изоферментов - Липазы I и Липазы II
3.3.1. Исследование аминокислотного состава липаз 67
3.3.2. Влияние рН и температуры на активность изоферментов.. 68
3.4. Заключение 70
ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ НЕКОТОРЫХ КАТАЛИТИЧЕСКИХ И КИНЕТИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК ЛИПАЗЫ I RHIZOPUS ORYZAE 1403
4.1. Исследование кинетических характеристик гидролиза трибутирина Липазой I
4.1.1 Влияние концентрации фермента на гидролиз трибутирина
2. Определение кинетических констант гидролиза трибутирина 71
3. Исследование влияния температуры и рН на кинетические константы гидролиза трибутирина 77
4. Определение рК функциональных групп активного центра Липазы I 79
Исследование функциональных групп активного центра Липазы I
1. Идентификация имидазольной группы Липазы I фотоокислением 79
2. Модификация Липазы I диэтилпирокарбонатом 83
3. Модификация Липазы I и-хломеркурибензоатом 88
4. Модификация Липазы I фенилметилсульфонилфторидом. 90
5. Механизм действия Липазы 1 93
Исследование специфичности действия липазы
Rhizopus oryzae 1403 и определение кинетических характеристик ферментативного гидролиза триглицеридов
1. Субстратная специфичность препарата липазы Г10Х 97
2. Кинетические параметры гидролиза триглицеридов Липазой 1 97
3. Специфичность Липазы I к жирным кислотам 102
4. Позиционная специфичность Липазы 1 103
Заключение 105
ИММОБИЛИЗАЦИЯ ЛИПАЗЫ RHIZOPUS ORYZAE 1403 И ИССЛЕДОВАНИЕ ЕЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
Адсорбция липазы на неионогенном носителе 107
1. Выбор оптимальных условий сорбции 108
5.1.2. Физико-химические свойства иммобилизованной липазы... 110
5.2. Иммобилизация липазы путем связывания с анионном АВ-17-2П ПО
5.2.1. Метод иммобилизации липазы наанионите 112
5.2.2. Изучение физико-химических свойств липазы иммобилизованной на АВ-17-2П 113
5.2.3 Исследование характера взаимодействия липазы с
анионитом АВ-17-2П методом ИК-спектроскопии
5.2.4. Исследование кинетических характеристик гидролиза трибутирина 119
5.3. Непрерывный гидролиз растительного масла в реакторе с иммобилизованными липазами 123
5.4. Заключение 124
6. НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ ЛИПАЗЫ RHIZOPUS ORYZAE 1403 В ХЛЕБОПЕЧЕНИИ
6.1. Динамика потребления глюкозы дрожжевыми клетками в присутствии масла и продуктов его гидролиза 127
6.2. Влияние гидролизованного масла на свойства клейковины пшеничного теста.... 133
6.3. Изучение свойств пшеничного крахмала под действием гидролизованного масла
144
6.3.1. Влияние масла на вязкость крахмальных растворов
6.3.2. Исследование пластической прочности крахмального студня
6.4. Заключение 149
ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ 150
ЛИТЕРАТУРА 151
ПРИЛОЖЕНИЯ 180
