Введение
Список сокращений 6
1. Обзор литературы 7
1.1. Состав и строение ДНК 7
1.2. Практическое значение ДНК и ее производных 8
1.3. Источники и способы выделения ДНК из биологического материала .
1.4. Способы гидролиза ДНК 25
1.5. Общая характеристика и классификация липидов и их функции 27
1.6. Области применения липидов. 30
1.7. Источники получения липидов 32
1.8. Методы выделения и очистки липидов. 34
1.9. Характеристика галофильных и метанокисляющих бактерий. 38
1.9.1. Характеристика галофильных бактерий 38
1.9.2. Характеристика метилококков 45
2. Материалы и методы 50
2.1. Объекты исследования 50
2.2. Реагенты 51
2.3. Методы анализа
2.3.1. Определение влажности образца 53
2.3.2. Количественное определение азотсодержащих веществ в белковых растворах
2.3.3. Количественное определение углеводов 54
2.3.4. Определение содержания нуклеиновых кислот 55
2.3.5. Методика определения концентрации фосфат-иона в водном растворе методом Фиска-Саббароу. 56
2.3.6. Определение содержания ДНК по Дише. 56
2.3.7. Определение индекса растворимости азота (nsi) 57
2.3.8. Определение дезоксирибонуклеозидов в растворе методом двумерной тонкослойной хроматографии 57
2.3.9. Установление чистоты препарата методом ТСХ
2.3.10. Определение эффективности гидролиза ДНК методом одномерной ТСХ 59
2.3.11. Определение массового содержания основного вещества в препарате по поглощению в УФ спектре. 60
2.3.12. Определение общих жиров. 60
2.3.13. Тонкослойная хромотография 61
2.4. Методы исследования 62
2.4.1. Методика проведения концентрирования вакуум - выпариванием.
2.4.2. Методика проведения осаждения белковых веществ из водных, водно-спиртовых и водно-ацетоновых растворов 63
2.4.3. Методика проведения процесса ультрафильтрации
2.4.3.1. Устройство и принцип действия лабораторной установки концентрирования 63
2.4.3.2. Методика проведения процесса концентрирования
2.4.4. Методика проведения ионного обмена 65
2.4.5. Методика проведения ферментативного гидролиза 66
2.4.6. Методика проведения гель-электрофореза в полиакриловом геле 66
2.4.7. Методика проведения сушки
2.4.7.1. Распылительная сушка 67
2.4.7.2. Лиофильная или сублимационная сушка 69
3. Результаты и обсуждение 73
3.1. Разработка основ технологии выделения липидов из биомассы бактерий Methylococcus capsulatus 74
3.1.2. Хроматографический анализ полученной липидной фракции 79
3.1.3. Изучение процесса фракционирования экстракта липидов биомассы бактерий Methylococcus capsulatus 82
3.2. Разработка основ технологии выделения концентратов ДНК и РНК из биомассы бактерий Methylococcus capsulatus 86
3.3. Получение препаратов ДНК из других источников микробного происхождения
3.3.1. Исследование процесса выделения каротиноидов из биомассы бактерий Halobacterium halobium. 94
3.3.2. Выделение нуклеиновых компонентов из биомассы Bifidobacterium bifidum 105
3.3.3. Выделение нуклеиновых компонентов из отходов микробного происхождения. 105
3.4. Разработка основ технологии получения производных аденина,
гуанина, тимина и цитозина из бактериальной ДНК 109
3.4.1. Выбор способа гидролиза 109
3.4.2. Исследование процесса выделения производных гуанина 115
3.4.3. Исследование процесса выделения производных тимина
3.4.5. Очистка растворов производных нуклеиновых кислот. 125
3.4.6. Апробация разработанной технологической схемы получения производных нуклеиновых кислот для ДНК, выделенной из биомассы бактерий Methylococcus capsulatus 130
3.5. Выделение белковой фракции из денуклеинизированной биомассы Methylococcus capsulatus 133
3.5.1. Подбор оптимальных условий кислотной экстракции белковых веществ из денуклеинизированной биомассы Methylococcus capsulatus 134
3.5.2. Подбор оптимальных условий ферментативного гидролиза белковых изолятов из денуклеинизированной биомассы Methylococcus capsulatus 137
3.5.3. Подбор оптимальных условий ферментативной экстракции белковых веществ из денуклеинизированной биомассы Methylococcus capsulatus 138
3.5.4. Исследование влияния различных видов сушки на качество получаемых белковых веществ. 139
4. Расчт технико-экономических показателей цеха по комплексной переработке биомассы Methylococcus capsulatus мощностью 2 тонн/год по исходному сырью . 143
Выводы 145
Заключение 147
Список литературы 148
