Введение
1. Обзор литературы 14
1.1 В-хромосомы 14
1.1.1. Происхождение В-хромосом 15
1.1.1.1 Происхождение B-хромосом от аутосом 15
1.1.1.2 Происхождение В-хромосом от половых хромосом 16
1.1.1.3 Происхождение В-хромосом в результате межвидовой гибридизации 17
1.1.2 Отличительные свойства В-хромосом 19
1.1.2.1 Перспективы использования В-хромосом в биотехнологии 21
1.1.3 Структура В-хромосом 21
1.1.3.1 Молекулярный состав В-хромосом 21
1.1.3.2. Локализация уникальных аутосомных генов на добавочных хромосомах 25
1.1.4 В-хромосомы млекопитающих 31
1.2 Сегментные дупликации и амплификация генов 36
1.3 Структура и функции генов TNNI3K, FPGT и LRRIQ3 40
1.3.1 Структура и функции гена TNNI3K 41
1.3.2 Структура и функции гена FPGT 43
1.3.3 Структура гена LRRIQ3 44
1.4 Род косуля Capreolus 44
1.4.1 Филогенетические связи семейства Cervidae 46
1.5 Хромосомная эволюция семейства оленьих (Cervidae) 52
1.6 Заключение 53
2. Материалы и методы 55
2.1 Материалы 55
2.2. Методы 59
2.2.1 Культивирование культур клеток фибробластов и получение суспензии хромосом 59
2.2.2 Приготовление препаратов метафазных хромосом 60
2.2.3 GTG-бэндинг 61
2.2.4 Флуоресцентная in situ гибридизация 61
2.2.4.1 Гибридизация 61
2.2.4.2 Постгибридизационные отмывки, детекция и усиление сигнала 61
2.2.5 Полимеразная цепная реакция 62
2.2.6 DOP-ПЦР 63
2.2.7 Получение DOP библиотеки ДНК ВАС клонов 63
2.2.8 Мечение ДНК ВАС клонов 64
2.2.9 Полимеразная цепная реакция в реальном времени 64
2.2.10 Получение Cot10 ДНК косули 66
2.2.10.1 Реассоциация ДНК 66
2.2.10.2 Гидролиз однонитчатой ДНК S1-нуклеазой 66
2.2.11 Секвенирование ДНК 67
2.2.11.1 Секвенирование ДНК 67
2.2.11.2 Переосаждение ДНК 67
3. Результаты и обсуждение 68
3.1 Стандартизация кариотипа косули, выявление гомологичных районов аутосом косули, коровы и верблюда 70
3.2 Картирование участков ДНК, лежащих на В-хромосомах косули 77
3.2.1 Картирование участков ДНК, лежащих на В-хромосомах косули с помощью ВАС клонов коровы 77
3.2.2 Картирование участков ДНК, лежащих на В-хромосомах косули, с помощью ПЦР на библиотеке сортированных добавочных хромосом 82
3.3 Оценка копийности генов, присутствующих на добавочных хромосомах у сибирской
косули 89
3.4 Сравнение первичной структуры гомологичных фрагментов ДНК аутосом и В-хромосом 92
3.4.1 Сравнение первичной структуры гомологичных фрагментов ДНК аутосом и В-хромосом гена LRRIQ3 93
3.4.2 Сравнение первичной структуры гомологичных фрагментов ДНК аутосом и В-хромосом генов TNNI3K и FPGT 95
3.5 Оценка эволюционной консервативности генов TNNI3K и FPGT 96
3.5.1 Сравнение первого экзона гена FPGT в ряду млекопитающих 99
3.5.2 Сравнение второго экзона гена FPGT в ряду млекопитающих 102
3.5.3 Сравнение третьего экзона гена FPGT в ряду млекопитающих 106
3.5.4 Сравнение четвертого экзона гена FPGT в ряду млекопитающих 107
3.5.5 Сравнение промоторной области гена TNNI3K у оленьих 110
3.5.6 Сравнение первого экзона гена TNNI3K у оленьих 111
3.6 Обнаружение транскрипционной активности копии гена FPGT, расположенного на В-хромосомах 112
4. Заключение
