Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Теории развития канцерогенеза 12
1.1.1. Мутационная теория 12
1.1.2. Эпигеномная теория 13
1.1.3. Вирусная теория 13
1.2. Протоонкогены и гены-супрессоры 13
1.2.1. Гипотеза Кнудсона 15
1.3. Механизмы действия генов-супрессоров 17
1.3.1. Гены хранители клеточного цикла 21
1.3.1.1. р16 21
1.3.2. Гены общего контроля 22
1.3.2.1. BRCA1,BRCA2 23
1.4. Эпигенетические механизмы 24
1.4.1. Метилирование-как вид эпигенетической модификации ДНК 25
1.4.2. Метилирование ДНК в нормальных клетках 28
1.4.3. Нарушения метилирования ДНК при канцерегенезе
1.4.3.1. Тотальное гипометилирование генома 31
1.4.3.2. Локальное гиперметилирование 33
Глава 2. Материалы и методы исследования 38
2.1. Сбор клинического материала 38
2.2. Клеточные линии опухолей, использованные в работе з
2.3. Выделение геномной ДНК из клеточных линий опухолей 39
2.4. Выделение геномной ДНК из лимфоцитов человеческой крови 40
2.5. Выделение геномной ДНК из замороженных тканевых срезов 40
2.6. Выделение геномной ДНК из тканевых срезов, фиксированных в парафине 41
2.7. Бисульфитная модификация геномной ДНК 41
2.8. Полимеразная цепная реакция 42
2.8.1.Амплификация бисульфит-модифицированой геномной ДНК 42
2.8.2.Амплификация бисульфит-модифицированой геномной ДНК с
использованием метил-специфичной количественной ПЦР в реальном
времени 44
2.9. Обработка полученных данных методом статистического анализа...48
2.10. Програмное обеспечение 48
Глава 3. Оценка статуса метилирования промоторной области генов супрессоров опухолевого роста при спорадическом раке молочной железы и яичников 49
Глава 4. Анализ статуса метилирования исследуемых генов в образцах морфологически нормальных тканей молочной железы и лимфоцитах человеческой крови . 55
Глава 5. Анализ статуса метилирования исследуемых генов для клеточных видов опухолей молочной железы и яичников 63
Глава 6. Анализ метилированого статуса исследуемых генов в биопсийном материале, полученном от больных раком молочной железы и яичников 68
Глава 7. Статистический apia лиз статуса метилирования исследуемых генов в опухолевых образцах для рака молочной железы и яичников 73
7.1. Сравнительный анализ статуса метилирования исследуемых генов в морфологически нормальных и опухолевых образцах для рака молочной железы и яичников 74
7.2. Расчет диагностической чувствительности и специфичности для каждого исследованного гена при раке молочной железы и яичников 82
Заключение .87
Выводы 89
Список литературы 90
