Введение
2.Обзор литературы 10
2.1. Историческая справка о вирусной диарее КРС 10
2.2. Классификация вируса вирусной диареи КРС 11
2.3. Эпизоотологические и клинические характеристики заболевания 12
2.4. Морфологические и физико-химические свойства вириона 16
2.5. Геном вируса вирусной диареи КРС 16
2.6. Протеины вируса вирусной диареи КРС 21
2.7. Репликация вируса вирусной диареи КРС 29
2.8.1. Проникновение вируса в клетку 30
2.8.2. Трансляция генома вируса вирусной диареи КРС 31
2.8.3. Процессинг полипротеина 31
2.8.4. Репликация генома вируса вирусной диареи КРС 33
2.8.5. Сборка вирионов и отпочковывание их от клетки 34
2.9. Цитопатогенные штаммы вируса вирусной диареи КРС 34
2.10. Диагностика вирусной диареи КРС ...35
2.11. Заключение по обзору литературы 41
3. Собственные исследования 43
3.1. Материалы 43
3.1.1. Вирус вирусной диареи КРС 43
3.1.2. Реактивы и ферменты , 46
3.1.3. Растворы и буферные смеси 47
3.1.4. Оборудование 48
3.2. Методы 49
3.2.1. Расчет праймеров для ПЦР 49
3.2.2. Выделение РНК 50
3.2.3. Обратная транскрипция - ПЦР 51
3.2.4. Очистка продуктов ПЦР 52
3.2.5. Реакция секвенирования 52
3.2.6. Анализ первичной и вторичной структур нуклеиновых кислот 53
4. Результаты собственных исследований и их обсуждение...54
4.1. Стратегия разработки метода выявления генома вируса вирусной диареи КРС 54
4.2. Анализ профиля вариабельности 5-нетранслируемой области генома вируса вирусной диареи КРС 55
4.3. Подбор праймеров для амплификации фрагмента 56
нетранслируемой области генома вируса вирусной диареи КРС 58
4.4. Оптимизация метода выявления генома вируса вирусной диареи КРС в вируссодержащем материале 61
4.5. Выявление генома вируса вирусной диареи КРС в патологическом материале 64
4.6. Выявление контаминации вирусом вирусной диареи КРС клеточных культур 74
4.7. Оптимизация условий секвенирования фрагмента 5-
нетранслируемой области генома вируса вирусной диареи КРС 77
4.8. Генотипирование и анализ нуклеотидных последовательностей выявленных изолятов вируса вирусной диареи КРС 77
4.9. Анализ предполагаемой вторичной структуры фрагмента 5-нетранслируемой области генома выявленных изолятов вируса вирусной диареи КРС 86
5. Заключение 92
6. Выводы 98
7. Практические предложения 100
8. Список литературы 101
Приложения 121
