Введение
1 Обзор литературы 16
1.1 Современные представления об исследуемой проблеме 16
1.2 Опухолевые стволовые клетки мультиформной глиобластомы 23
1.3 Стволовые клетки в лечении опухолей головного мозга 33
1.4 Существующие подходы к лечению глиальных опухолей мозга с использованием клеточных технологий 41
2 Материалы и методы 50
2.1 Опухолевые клетки различных типов 51
2.2 Методы исследования миграции стволовы и соматических клеток млекопитающих к клеткам глиомы линии С6 in vitro 52
2.3 Методы исследования особенностей миграции стволовых клеток человека к клеткам злокачественных опухолей in vitro 53
2.4 Методы исследования механизмов миграции клеток in vivo 54
2.5 Методы фармакологического тестирования in vitro и in vivo 56
2.6 Иммуноцитохимические исследования клеток в культуре 58
2.7 Методы окраски клеток флуоресцентными красителями 59
2.8 Методы морфологического и иммуногистохимического исследования 60
2.9 Метод цитофлуориметрии 61
2.10 Методы изучения противоопухолевого действия стволовых клеток in vitro и in vivo 66
2.11 Методы сравнительного исследование клеточных протеомов... 68
2.12 Методы изучение воздействия TGF - 1 на клетки линии U глиобластомы человека
2.13 Методы иммуноферментного анализа 73
2.14 Статистическая обработка результатов 73
Результаты собственных исследований
3 Анализ взаимодействия стволовых и опухолевых клеток in vitro 74
3.1 Закономерности миграции нейральных и гемопоэтических стволовых клеток к опухолевым клеткам различных линий in vitro 74
3.1.1 Миграция стволовых клеток млекопитающих в сочетанных культурах с клетками различных линий in vitro 74
3.1.2 Миграция стволовых клеток человека в сочетанных культурах с клетками злокачественных опухолей различных линий in vitro
3.2. Взаимодействие стволовых клеток человека с клетками злокачественных опухолей in vitro 82
3.2.1 Взаимодействие гемопоэтических стволовых клеток с на модели глиомы линии С6 in vitro 88
3.2.2 Взаимодействие гемопоэтических стволовых клеток с клетками злокачественных опухолей человека 92
3.3 Обсуждения результатов главы 3 98
3.3.1 Обсуждение результатов исследования миграции нейральных и гемопоэтических стволовых клеток к опухолевым клеткам различных линий in vitro 98
3.3.2 Обсуждение результатов исследования взаимодействие стволовых клеток человека с клетками злокачественных опухолей in vitro 102
4 Анализ взаимодействия стволовых и опухолевых клеток in vivo
4.1.1 Общая характеристика экспериментальной модели глиобластомы in vivo 109
4.1.2 Морфологические свидетельства миграции гемопоэтических стволовых клеток в опухолевый очаг 114
4.1.3 Морфологические свидетельства миграции нейральных стволовых клеток в зону неоплазии 122
4.1.4 Обсуждение результатов исследования миграции гемопоэтических и нейральных стволовых клеток в опухолевый очаг на модели мультиформной глиобластомы in vivo 125
4.2. Взаимодействие трансплантированных стволовых клеток с клетками глиомы С6 в опухолевом очаге 127
4.2.1 Морфологическая характеристика опухолевых узлов в головном мозге крыс контрольной группы 127
4.2.2 Морфологическая характеристика опухолевых узлов в головном мозге крыс группы клетки 139
4.2.3 Иммуногистохимическое исследование ткани опухоли после введения гемопоэтических стволовых клеток 142
4.2.4 Иммуноферментный анализ экспрессии цитокинов в опухоли и прилегающей ткани мозга после введения стволовых клеток 156
4.2.5 Обсуждение результатов исследования взаимодействия трансплантированных стволовых клеток с клетками глиомы С6 в опухолевом очаге 158
5. Модификация гемопоэтических стволовых клеток как способ усиления их противоопухолевого потенциала 160
5.1 Изучение особенностей и механизмов действия фаскаплизина в отношении клеток глиомы С6 in vitro 162
5.2 Сопоставление in vitro эффективности фаскаплизина и стандартных средств фармакотерапии глиальных опухолей 168
5.3 Сравнительная эффективность традиционной терапии темозоломидом и адресной доставки фаскаплизина в очаг глиомы in vivo 169
5.4 Подбор концентраций фаскаплизина, вызывающих модификацию стволовых (CD34+) клеток in vitro 172
5.5. Сокультивирование модифицированных гемопоэтических стволовых клеток с клетками глиомы С6 175
5.6 Сравнение противоопухолевой эффективности нативных и модифицированных фаскаплизином ГСК in vivo 178
5.7 Сопоставление уровней экспрессии ключевых цитокинов в ткани мозга крыс после введения модифицированных стволовых клеток 190
5.8 Обсуждение результатов модификации гемопоэтических стволовых клеток как способа усиления их противоопухолевого потенциала 193
6 Сравнительный анализ протеомов опухолевых и стволовых клеток человека 200
6.1 Сравнительный анализ протеомов клеток линии U87
глиобластомы человека до и после стимуляции TGF- 1 201
6.1.1 Анализ биологического значения белков клеток линии U87 203 глиобластомы человека значительно увеличивших уровень синтеза после стимуляции TGF- 1 202
6.1.2 Анализ биологического значения белков клеток линии U87 значительно снизивших уровень синтеза после стимуляции TGF-1 204
6.1.3 Анализ изменений экспрессии белков глиобластомы U87 в после стимуляции TGF-1 в пределах функциональных кластеров 206
6.2 Сравнительный анализ протеомов опухолевых стволовых CD133+
клеток глиобластомы, нейральных CD133+ и мезенхимальных CD29+ CD44+ CD73+ CD90+ СD34– стволовых клеток человека 214
6.2.1 Распределение белков на функционально значимые кластеры 215
6.2.2 Прецизионный анализ протеомных профилей сравниваемых клеток 218
6.3 Обсуждение результатов главы 6 219
8. Заключение 225
9. Выводы 249
10. Список литературы
