Введение
Глава 1. Окислительный стресс 7
1.1, Источники АФК 8
1.2. Механизм действия АФК 9
1.3. Защитные системы против окислительного стресса 9
1.3.1. Антиоксидантные системы 9
Альтернативные переносчики электронов (терминальные оксидазы) 11
Образование изоформ ферментов 12
1.3.4. Системы, поддерживающие редокс-потенциал в клетке 13
1.3.5. Системы, восстанавливающие повреждения 20
1.3.6. Полиамины в защите клеток от окислительного стресса 21
1.4. Регуляция генной экспрессии антиоксидантных систем 22
Глава 2. Тепловой стресс 24
2.1. Белки теплового шока 25
2.2. Регуляция синтеза белков теплового шока 27
2.3. Убиквитин 28
2.4. Белки общего стрессорного ответа 29
2.5. Трегалоза ..30
2.6. Спирты, участвующие в защите клеток от теплового воздействия..32 Глава 3. Этанольный стресс 32
3.1. Влияние этанола на плазматическую мембрану 32
3.2. Метаболизм этанола 34
III. Экспериментальня часть
Глава 4. Материалы и методы исследования 36
4.1. Микроорганизмы и условия выращивания 36
4.2. Определение активности дыхания 36
4.3. Создание стрессовых условий 36
4.4. Определение выживаемости клеток 37
4.5. Определение влияния рН на выживаемость клеток 37
4.6. Экстракция и определение цАМФ 37
4.7. Получение бесклеточных экстрактов 37
4.8. Определение супероксиддисмутазы 38
4.9. Определение каталазы 38
4.10. Определение глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 38
4.11. Определение глутатионредуктазы 38
4.12. Определение НАД+-зависимой алкогольдегидрогеназы 39
4.13. Определение белка 39
4.14. Ультратонкие срезы клеток 39
IV. Результаты и обсуждение
Глава 5. Адаптация Y. lipolytica к действию оксидантов 40
5.1. Выживаемость клеток в зависимости от действия оксидантов (Н202, менадиона и юглона) 40
5.2. Перекрёстная устойчивость Y. lipolytica к различным оксидантам 43
5.3. Активность антиоксидантных ферментов Y. lipolytica 44
Глава 6. Адаптация Y. lipolytica к действию температуры 46
6.1 Выживаемость Y. lipolytica после воздействия температуры 46
6.2. Перекрёстная устойчивость клеток к различным стрессам 47
6.3 Влияние рН на термоустойчивость Y. lipolytica 49
6.4. Активность антиоксидантных ферментов Y. lipolytica в условиях теплового стресса 50
Глава 7. Адаптация Y. lipolytica к действию этанола 51
7.1 Выживаемость клеток после воздействия этанола 52
7.2 Перекрёстная устойчивость клеток к различным стрессам 53
7.3 Активность антиоксидантных ферментов в условиях этанольного стресса 55
Глава 8. Дыхательная активность Y. lipolytica в условиях окислительного, теплового и этанольного стрессов 56
8.1 Дыхательная активность Y. lipolytica в условиях окислительного стресса 56
8.2 Дыхательная активность Y. lipolytica в условиях теплового стресса 57
8.3. Участие альтернативной оксидазы в адаптивном ответе клеток на окислительный и тепловой стрессы 58
8.4 Дыхательная активность Y. lipolytica в условиях этанольного стресса 63
8.5 Участие альтернативной оксидазы в адаптивном ответе клеток на действие этанола 64
Глава 9. Изменение динамики внутриклеточного пула цАМФ при воздействии оксидантов, температуры и этанола 65
Глава 10. Изучение изменений ультраструктуры клеток Y. lipolytica в условиях окислительного, теплового и этанольного стрессов 69
ЮЛ. Ультраструктура клеток из различных фаз роста 69
10.2. Ультраструктура клеток Y. lipolytica в условиях окислительного стресса 71
10.3. Ультраструктура клеток Y. lipolytica в условиях теплового шока 72
10.4. Ультраструктура клеток Y. lipolytica в условиях этанольного стресса 74
V. Выводы 77
Vi. Список литературы
