Введение
Глава 1. Ответ бактерий Escherichia coli на окислительный стресс 13
1.1. Реактивные формы кислорода и их токсическое действие на клетки 13
1.2. Компоненты антиоксидантной защиты 19
1.3. Регуляция ответа Е. coli на окислительный стресс 23
1.3.1. Ответ на действие перекиси водорода, роль OxyR регулона 24
1.3.2. Ответ на действие генераторов супероксид аниона, роль SoxRS регулона ... 26
1.3.3. Роль О регулона в защите клеток от окислительного стресса...29
1.4. Глутатион и его роль в жизнедеятельности Е. coli 30
1.4.1. Ферменты метаболизма глутатиона 34
1.5. Роль калия у бактерий Е. coli 37
Глава 2. Антибактериальные вещества 40
2.1. Общие особенности антибактериальных препаратов 40
2.2. Классификация антибактериальных препаратов 41
2.3. Краткая характеристика применяемых в работе антибактериальных веществ. 42
2.3.1. Хлорамфеникол (левомицетин) 42
2.3.2. Рифампицин 44
2.3.3. Грамицидины 45
2.3.4. Ацетамидофенол 47
2.4. Антибиотикоустойчивость, взаимосвязь транскрипционных активаторов МагА и SoxS 49
Глава 3. Объекты и методы исследования 54
3.1. Бактериальные штаммы 54
3.2. Питательная среда и условия культивирования 56
3.3. Определение содержания общего и наружного окисленного глутатиона .57
3.4. Определение GSSG внутри клетки 58
3.5. Определение активности -галактозидазы 62
3.6. Определение концентрации внутриклеточного калия 62
3.7. Влияние условий аэрации и температуры на рост бактерий Е. coli, обработанных антибактериальными веществами с разным спектром действия 62
3.8. Методика определения выживаемости клеток с использованием верхнего агара 63
3.9. Статистическая обработка данных 63
Глава 4. Роль антиоксидантных систем в отклике бактерий Е. coli на действие антибиотиков и ацетамидофенола 65
4.1. Грамицидин 65
4.1.1. Влияние условий культивирования на рост бактерий Е. coli, обработанных грамицидином 65
4.1.2. Влияние грамицидина на рост Е. coli, несущих мутации в антиоксидантных генах 70
4.1.3. Влияние грамицидина S на экспрессию антиоксидантных генов70
4.1.4. Влияние грамицидина на статус глутатиона 76
4.2. Хлорамфеникол 84
4.2.1. Влияние условий культивирования на рост бактерий Е. coli, обработанных хлорамфениколом 84
4.2.2. Влияние хлорамфеникола на рост Е. coli, несущих мутации в антиоксидантных генах 85
4.2.3. Влияние хлорамфеникола на экспрессию антиоксидантных генов 88
4.2 А. Влияние хлорамфеникола на статус глутатиона и уровень внутриклеточного калия 92
4.3. Рифампицин 92
4.3.1. Влияние условий культивирования на рост бактерий Е. coli, обработанных рифампицином 92
4.3.2. Влияние рифампицина на рост Е. coli, несущих мутации в антиоксидантных генах 95
4.3.3. Влияние рифампицина на активность антиоксидантных систем.95
4.3.4. Влияние рифампицина на статус глутатиона и уровень внутриклеточного калия. 99
4.4. Ацетамидофенол 102
4.4.1. Влияние условий культивирования на рост бактерий Е. coli, обработанных ацетамидофенолом 102
4.4.2. Влияние ацетамидофенола на рост Е. coli, несущих мутации в антиоксидантных генах 108
4.4.3. Влияние ацетамидофенола на экспрессию антиоксидантных генов 109
4.4.4. Влияние ацетамидофенола на статус клеточного глутатиона и внутриклеточный калий 110
Глава 5. Комбинированное действие ацетамидофенола и антибиотиков на растущие клетки Е. coli 112
5.1. Влияние предобработки ацетамидофенолом на рост бактерий Е. coli, обработанных грамицидином 112
5.2. Влияние предобработки ацетамидофенолом на рост бактерий Е. coli, обработанных хлорамфениколом 113
5.3. Влияние предобработки ацетамидофенолом на рост бактерий Е. coli, обработанных рифампицином 113
Заключение 118
Выводы 132
Список литературы 134
