Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 17
1.1. Характеристика липополисахарида и капсулы V cholerae 0139 17
1.2. Серологические методы диагностики возбудителя холеры 0139 серогруппы 31
1.3. Моноклональные антитела в изучении холерных вибрионов 38
Собственные исследования
ГЛАВА 2. Материалы и методы 45
2.1. Лабораторные животные 45
2.2. Бактериальные штаммы 45
2.3. Клеточные линии позвоночных 49
2.4. Питательные среды и реактивы 49
2.5. Гибридизация клеток 50
2.6. Клонирование гибридом 50
2.7. Культивирование гибридом in vitro и in vivo 51
2.8. Криоконсервирование гибридом 51
2.9. Очистка иммуноглобулинов 52
2.10. Конъюгирование иммуноглобулинов с ФИТЦ 53
2.11. Метод иммунофлюоресценции 53
2.12. Иммуноферментные методы 54
2.13. Иммунодиффузия в геле по Оухтерлони 56
2.14. Реакция агглютинации 56
2.15. Методы получения препаратов ЛПС и оценки их чистоты 57
2.16. Метод получения белков наружной мембраны 57
2.17. Электрофорез в полиакриламидном геле 58
2.18. Метод тонкослойной хроматографии 59
2.19. Иммуноблоттинг 60
2.20. Методы статистической обработки результатов 60
ГЛАВА 3. Получение и характеристика моноклональных антител к липополи-сахариду V. CHOLERAE 0139 61
3.1. Характеристика препаратов ЛПС, выделенных из клеток холерных вибрионов 0139 серогруппы 61
3.2. Получение гибридом-продуцентов моноклональных антигел к ЛПС V cholerae 0139 и их первичный скрининг 63
3.3. Изучение специфичности и активности МКА в серологических методах 68
3.4. Определение класса и подкласса моноспецифических иммуноглобулинов 74
3.5. Исследование эпитопной направленности МКА 75
3.6. Получение препаративных количеств МКА, их очистка 80
ГЛАВА 4. Антигенные свойства штаммов v. cholerae 0139 различного происхождения 83
4.1. Характеристика иммунохимической активности штаммов V cholerae 0139, выделенных от человека и из воды 83
4.2. Сравнительное изучение антигенной структуры
клинических и водных штаммов V cholerae 0139 92
ГЛАВА 5. Практическое применение моноклональных антител к ЛПС-0139 96
5.1. Иммунофлуоресцентный диагностикум на основе
МКА для идентификации штаммов V cholerae 0139 97
5.2. Исследование полисахаридных антигенов штаммов V. cholerae 0139, измененных по признаку агглютинабельности, и некультивируемых форм 101
Заключение 108
Выводы 119
Список литературы 121
