Введение
1. Обзор литературы
1.1. Мышечная подвижность, теория "скользящих нитей" и исключения из неё 13
1.2. Белки тонких и толстых нитей 15
1.2.1. Тонкие нити .16
1.2.1.1. Актин 16
1.2.1.2. Тропомиозин 21
1.2.2. Толстые нити 25
1.2.2.1. Миозин 26
1.2.2.2. Миород 29
1.2.2.3. Твитчин 32
1.3. Особенности функционирования гладких запирательных (catch) мышц моллюсков 33
1.4. Гипотезы реализации catch-механизма 36
1.4.1. "Мостиковая" 36
1.4.2. "Парамиозиновая" 36
1.4.3. "Твитчиновая" 37
1.4.4. "Миородовая" 39
1.4.5. "Кальпониновая" 40
2. Материалы и методы
2.1. Экспериментальные методы
2.1.1. Выделение сократительных белков из запирательных мышц мидии .42
2.1.2. Выделение сократительных белков из скелетных мышц кролика 45
2.1.3. Реконструкция белок-белковых моделей 47
2.2. Биохимические методы
2.2.1. Гель-фильтрационная хроматография 49
2.2.2. ДСН-электрофорез в полиакриламидном геле 49
2.2.3. Фосфорилирование миорода 51
2.2.4. Определение концентрации белков 51
2.2.5. Определение Mg2+-ATФазной активности миозина 52
2.3. Физико-химические методы
2.3.1. Измерение вязкости 53
2.3.2. Высокоскоростное осаждение белковых комплексов 54
2.3.3. Измерение рассеяния света 54
2.3.4. Полимеризация лиофилизированного G-актина мидии в F-актин .54
2.4. Электронная микроскопия 55
3. Результаты
3.1. Получение глобулярной формы актина из запирательных мышц двустворчатых моллюсков 56
3.1.1. Очистка глобулярного актина мидии при помощи гель-фильтрации 59
3.1.2. Факторы, ингибирующие деполимеризацию "природного" актина мидии 60
3.2. Сравнение гладкомышечного актина моллюсков со скелетномышечным актином позвоночных животных 63
3.2.1 Молекулярная масса и электронная микроскопия актина из мышц мидии и актина из мышц кролика 63
3.2.2. Кинетика полимеризации актина мидии и актина кролика 64
3.2.3. Активирование актином мидии и актином кролика Mg2+-АТФазной активности скелетномышечного миозина 64
3.2.4. Тестирование вязкости растворов актина из мышц мидии и актина из мышц кролика 65
3.3. Хроматографические фракции гладкомышечного актина моллюсков и скелетномышечного актина позвоночных могут иметь примеси белков концевого фактора 67
3.4. Измерения вязкости полимерного актина мидии в присутствии тропомиозина в гибридных и негибридных комплексах 70
3.5. Актин как основа тонкой нити в сократительных моделях и его взаимодействие с миородом в зависимости от фосфорилирования миорода 72
3.5.1. Очистка миорода гель-фильтрацией в присутствии мочевины 72
3.5.2. Влияние фосфорилирования миорода на Mg2+-АТФазную активность миозина мидии в гибридном комплексе с актином кролика 74
3.5.3. Вязкость негибридного актин-миородового комплекса 76
4. Обсуждение
4.1. Гладкомышечный актин из запирательных мышц моллюсков: особенности выделения, очистки и деполимеризации 78
4.2. О свойствах гладкомышечного актина моллюсков и скелетномышечного актина позвоночных, их вязкости и примесях 83
4.3. Тропомиозин мидии проявляет необычные свойства в гибридных комплексах с актином кролика 89
4.4. Взаимодействие F-актина и миорода в in vitro моделях 93
Выводы 97
Список литературы
