Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1 Основные методы борьбы со злокачественными новообразованиями..13
1.2 Механизмы гибели опухолевых клеток под влиянием радиотерапии 19
1.2.1 Апоптоз опухолевых клеток .19
1.2.2 Некроз опухолевых клеток .22
1.2.3 Аутофагия опухолевых клеток .24
1.3 Генетическая нестабильность опухолевых клеток 26
1.4 Роль мутаций в формировании радиорезистентности злокачественных опухолей 28
1.5 Роль сигнальных путей в формировании радиорезистентности опухолевых клеток .32
Глава 2. Материалы и методы 35
2.1 Объекты исследования 35
2.2 Ведение клеточных культур и условия проведения эксперимента 38
2.3 Методы молекулярного анализа 39
2.3.1 Оценка механизмов клеточной гибели 39
2.3.2 Выделение тотальной РНК .39
2.3.3 Электрофорез в агарозном геле .40
2.3.4 Обратная транскрипция 40
2.3.5 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) 41
2.3.6 Подбор праймеров к исследуемым генам .42
2.3.7 Анализ уровня экспрессии генов с использованием матрицы HGU133А 43
2.4 Биоинформационный анализ 44
2.4.1. Анализ интенсивности экспрессии генов 44
2.4.2 Поиск генов с заданным уровнем экспрессии 45
2.4.3 Построение сетей молекулярных (белок - белковых) взаимодействий генов 46
2.4.4 Поиск и расчет активации внутриклеточных сигнальных путей.46
Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение 47
3.1 Сравнительный анализ радиорезистентности раковых клеточных линий K562, HCT-116р (+/+), HCT-116р (-/-) и Me45 . 47
3.2 Поиск общих генов и сравнительный анализ экспрессии в радиорезистентной и радиочувствительных раковых клеточных линиях после облучения их в дозе 4 Гр .52
3.3 Изучение сетей молекулярных (белок-белковых) взаимодействий генов DAAM1, IFNAR2, PALLD и STK17A в радиорезистентной и радиочувствительных раковых клеточных линиях 61
3.4 Изучение внутриклеточных сигнальных путей, на которые оказывают влияние гены DAAM1, IFNAR2 и PALLD .72
3.5 Расчет активации внутриклеточных сигнальных путей в радиорезистентной и радиочувствительных клеточных линиях .82
Заключение 88
Выводы 92
Литература 93
