Введение
1. Ретротранспозоны дрозофилы и механизмы регуляции их активности (обзор литературы) 10
1.1 Общие представления о мобильных генетических элементах (МГЭ) 10
1.2 Класс ДНК-транспозонов 13
1.3 Класс ретроэлементов 13
1.4 Ретротранспозоны группы gypsy D. melanogaster 17
1.5 Общие представления об РНК-интерфренции 19
1.6 Контроль активности МГЭ в яичниках дрозофилы, обеспечиваемый короткими piРНК 21
1.7 Piwi – ключевой полифункциональный компонент piРНК пути 30
1.8 Взаимосвязь процессов РНК-интерференции и регуляции состояния хроматина в осуществлении контроля МГЭ 34
1.9 Геномные кластеры piРНК 36
1.10 Локус flamenco – основной источник piРНК в соматических клетках яичников 40
2. Материалы и методы 44
2.1 Линии D. melanogaster и условия их культивирования 44
2.2 Сбор тканей для последующего выделения РНК 45
2.3 Выделение геномной ДНК 45
2.4 Выделение тотальной РНК 46
2.5 Синтез кДНК 46
2.6 Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени 46
2.7 Полимеразная цепная реакция 47
2.8 Электрофоретический анализ нуклеиновых кислот в агарозном геле 48
2.9 Вычитающая гибридизация (ВГ) 49
2.10 Секвенирование ДНК 51
2.11 Биоинформатический анализ 51
3. Результаты и обсуждение 53
3.1. Исследование экспрессии на уровне транскрипции МГЭ группы gypsy в линиях MS и SS 53
3.2. Структурно-функциональный анализ МГЭ Tirant в линиях, мутантных по локусу flamenco 57
3.2.1. Исследование транскрипции МГЭ Tirant 57
3.2.2. Анализ 5 -нетранслируемой области Tirant 59
3.2.3. Исследование транспозиционной активности Tirant 62
3.2.4. Скрещивание изогенных линий 7Kw1 и 7K(1), анализ экспрессии Tirant у потомства 63
3.3. Гибридологический и молекулярный анализ взаимодействия flamenco и piwi
3.3.1. Скрещивание линий MS и SS с линией piwi3 65
3.3.2. Индивидуальные скрещивания линии SS с piwi3 68
3.3.3. Анализ экспрессии ретротранспозона gypsy в яичниках гибридов первого поколения 70
3.3.4. Экспрессия gypsy в семенниках гибридов первого поколения 74
3.3.5. Анализ экспрессии ретротранспозона Idefix в семенниках гибридов первого поколения 85
Заключение 87
Благодарности 94
Список литературы 95
