Введение
2 Обзор литературы 12
2.1 Африканская чума свиней, историческая справка 12
2.2 Факторы распространения АЧС 13
2.3 Структура вируса АЧС и его геном 17
2.4 Функциональные особенности генов вируса АЧС 26
2.5 Перспективы возможности создания средств специфической профилактики при АЧС 33
2.6 Заключение по обзору литературы 42
3 Собственные исследования 44
3.1 Материалы 44
3.2 Методы 46
4 Результаты и обсуждение результатов 49
4.1 Анализ возможности экспресс-оценки уровня репродукции вируса АЧС с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени 49
4.1.1 Построение калибровочной кривой для определения количества копий гена B646L вируса АЧС 50
4.1.2 Определение титра вируса АЧС изолята Krasnodar 07/17 в реакции гемадсорбции и ПЦР-РВ 53
4.1.3 Определение титра вируса по показателю Ct 56
4.2 Изучение консервативности генов вируса АЧС российских изолятов 60
4.2.1 Анализ расположения и направления открытых рамок считывания генов O61R, CP204L, X69R, A179L, B646L, I215L, E248R, EP402R и DP96R 61
4.2.2 Оптимизация условий амплификации выбранных генов с использованием подобранных праймеров 62
4.2.3 Определение нуклеотидных последовательностей генов российских изолятов и филогенетический анализ 65
4.3 Пополнение библиотеки генов вируса АЧС 73
4.3.1 Клонирование генов вируса АЧС 73
4.3.2 Библиотека генов вируса АЧС изолята Krasnodar 07/17 75
4.4 Получение клонов-продуцентов рекомбинантных белков вируса АЧС 78
4.5 Синтез рекомбинантных белков p30 и p54 в клетках E.coli 84
4.6 Изучение влияния рекомбинантных белков p30 и р54 вируса АЧС на репродукцию вируса in vitro 86
4.7 Синтез рекомбинантных белков pX69R, pE248R и CD2v в клетках CV- 90
4.7.1 Анализ экспрессии генов вируса АЧС в клетках CV-1: оценка специфичности рекомбинантных белков и определение их локализации 91
4.7.2 Накопление и очистка рекомбинантного белка CD2v 92
4.8 Изучение влияния рекомбинантного белка CD2v вируса АЧС на репродукцию вируса in vitro 93
4.9 Изучение влияния рекомбинантных гликопротеинов pX69R и pE248R вируса АЧС на его репродукцию in vitro 96
5 Заключение 99
5.1 Выводы 100
6. Принятые сокращения 103
7. Список литературы 106
8. Приложения 127
