ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .............................................................................. 11
1.1. Социальная значимость проблемы тромбозов .................................................... 12
1.2. Образование тромбов ............................................................................................. 13
1.2.1. Адгезия тромбоцитов .......................................................................................... 14
1.2.2. Механизм адгезии тромбоцитов к эндотелию ................................................. 17
1.2.3. Скопление тромбоцитов ..................................................................................... 19
1.3. Фармакологическая коррекция нарушений системы гемостаза ....................... 22
1.4. GSK-3β в процессах тромбообразования ............................................................. 28
1.5. Фармакологическая активность производных 2-оксиндола .............................. 30
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .................................... 33
2.1. Определение активности киназы гликогенсинтазы типа 3β (GSK-3b) in vitro 34
2.2. Изучение влияния производных 2-оксиндола на функциональную активность
тромбоцитов in vitro ...................................................................................................... 34
2.3. Исследования на первичных перитонеальных макрофагах ............................... 36
2.3.1. Выделение перитонеальных макрофагов ............................................... 36
2.3.2. Выделение моноцитов периферической крови ...................................... 37
2.3.3. Определение оксида азота (NO) .............................................................. 38
2.3.4. Определение цитокинов ........................................................................... 39
2.3.5. Определение жизнеспособности клеток (МТТ-тест) ............................ 39
2.3.6. Определение жизнеспособности клеток (ЛДГ-тест) ............................. 39
2.4. Изучение влияния соединения К-167 на функциональную активность
тромбоцитов in vivo. ...................................................................................................... 40
2.5. Изучение острой токсичности .............................................................................. 42
2.6. Влияние соединения К-167 на агрегацию тромбоцитов, индуцированную
различными агонистами ............................................................................................... 43
2.7. Исследование влияния соединения К-167 на пуриновые рецепторы
тромбоцитов ................................................................................................................... 44
2.8. Измерение уровня внутриклеточного кальция в тромбоцитах кролика .......... 45
2.9. Метод определения секреции АТФ из плотных гранул тромбоцитов ............. 47
2.10. Изучение влияния соединения К-167 на уровень тромбоксана А2 и 6-кето-простагладина F1α ......................................................................................................... 48
2.11. Метод интегральной оценки системы гемостаза (тромбоэластография) ....... 48
2.12. Модель артериального тромбоза, индуцированного аппликацией 50% раствора хлорида железа (III) на сонную артерию крыс ........................................... 49
2.13. Модель артериального тромбоза, индуцированного электрическим током .. 51
2.14. Модель тромбоза глубоких вен .......................................................................... 52
2.15. Изучение антитромботических свойств соединения К-167 на модели тромбоза сонной артерии в условиях инфаркта миокарда ........................................................ 53
2.16. Метод изучения влияния тестируемого соединения на время кровотечения 54
2.17. Исследование влияния соединения К-167 на уровень эндотелина-1 и фактора Виллебранда без и в условиях экспериментального сепсиса ................................... 55
2.18. Исследование влияния соединения К-167 на параметры тромбоэластограммы без и в условиях экспериментального сепсиса .......................................................... 55
2.19. Статистическая обработка данных ..................................................................... 56
ГЛАВА 3. ПОИСК В РЯДУ ПРОИЗВОДНЫХ 2-ОКСИНДОЛА ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫХ ИНГИБИТОРОВ ФЕРМЕНТА GSK-3b .................... 57
ГЛАВА 4. АНТИАГРЕГАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ПРОИЗВОДНЫХ 2-ОКСИНДОЛА IN VITRO И IN VIVO ........................................................................... 61
4.1. Поиск соединений с антиагрегантной активностью в ряду производных 2-оксиндола, проявляющих GSK3b-ингибирующую активность, in vitro ................. 62
4.2. Зависимость антиагрегантного эффекта производных 2-оксиндола от химической структуры .................................................................................................. 64
4.3. Антиагрегантная активность наиболее активного соединения К-167 in vivo .. 67
4.4. Изучение острой токсичности соединения К-167 .............................................. 68
Заключение .................................................................................................................... 71
ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ СОЕДИНЕНИЯ К-167 НА РАЗЛИЧНЫЕ ЗВЕНЬЯ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА ............................................................................................ 72
5.1. Влияние соединения К-167 на агрегацию тромбоцитов, стимулированную различными агонистами ............................................................................................... 72
5.2. Влияние соединения К-167 на пуриновые рецепторы тромбоцитов ................ 74
5.3. Влияние соединения К-167 на баланс тромбоксана и простациклина ............. 76
5.4. Влияние соединения К-167 на секреторную функцию тромбоцитов .......... 78
5.5. Изучение влияния соединения К-167 на параметры тромбоэластограммы 81
Заключение .................................................................................................................... 82
ГЛАВА 6. АНТИТРОМБОТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СОЕДИНЕНИЯ К-167 ....... 86
ГЛАВА 7. ВЛИЯНИЕ СОЕДИНЕНИЯ К-167 НА СИСТЕМУ ГЕМОСТАЗА В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО СЕПСИСА ............................................. 92
7.1. Влияние соединения К-167 на секреторную функцию макрофагов ................. 92
7.2. Исследование влияния соединения К-167 на параметры тромбоэластограммы крыс в условиях системной воспалительной реакции .............................................. 93
7.3. Влияние соединения К-167 на уровень эндотелина-1 и фактора Виллебранда в плазме крыс с экспериментальным сепсисом ............................................................ 96
ГЛАВА 8. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. .......................... 99
ВЫВОДЫ ..................................................................................................................... 102
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ..................................................................... 104
Список литературы ..................................................................................................... 105
