Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 7
1.1. Структура и свойства гликогенфосфорилазы Ь 7
1.2. Структура и свойства киназы фосфорилазы 14
1.3. Агрегация белков 20
1.4. Кристаллин: структура, свойства и шапероноподобная функция 26
1.5. Молекулярный краудинг и осмолиты 29
1.6. Постановка задачи 34
ГЛАВА 2. Материалы и методы 36
2.1. Материалы 36
2.1.1. Реактивы 36
2.1.2. Выделение гликогенфосфорилазы Ъ из скелетных мышц кролика 36
2.1.3. Выделение киназы фосфорилазы из скелетных мышц кролика 39
2.2. Методы 39
2.2.1. Электрофоретический анализ в ПААГ 39
22.2. Дифференциальная сканирующая калориметрия 40
2.2.3. Измерение ферментативной активности 40
2.2.4. Динамическое светорассеяние 41
2.2.5. Изучение кинетики тепловой агрегации и ассоциации белков методом динамического светорассеяния 45
2.2.6. Аналитическое ультрацентрифугирование 46
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 48
3.1. Исследование тепловой агрегации гликогенфосфорилазы 48
3.1.1. Денатурация Phb 48
3.1.2. Сопоставление процессов денатурации и агрегации Phb 48
3.1.3. Изучение тепловой агрегации Phb при 48 С 50
3.1.4. Исследование тепловой агрегации Phb при 37 С 57
3.2. Влияние а-кристаллина на тепловую агрегацию РЫ> 62
3.2.1. Влияние а-кристаллина на тепловую агрегацию Phb 62
3.2.2. Влияние а-кристаллина на термоинактивацию и термостабильность Phb 68
3.3. Исследование самоассоциации киназы фосфорилазы 71
3.3.1. Исследование самоассоциации РпКпри низкой ионной силе... 71
3.3.2. Исследование ассоциации киназы фосфорилазы в условиях, близких к физиологическим (физиологические значения ионной силы, условия краудинга) 78
Заключение 87
Выводы 90
Список литературы 92
