Введение
Глава 1. Применение твердофазных методов иммуно анализа для диагностики инфекционных заболеваний (Обзор литературы)
1.1. Общие принципы классификации иммунохимических методов 18
1.1.1. Основные принципы иммунохимического анализа 18
1.1.2. Типы образцов для иммунохимического анализа 20
1.1.3. Характеристики реагентов, используемых в иммуноанализе ... 22
1.1.4. Системы разделения реагентов, связавшихся и несвязавшихся в ходе иммунологической реакции 28
1.1.5. Системы детекции результатов иммунологического взаимодействия 36
1.1.5.1. Инструментальные методы детекции иммунологического связывания 36
1.1.5.2. Методы детекции результатов иммуноанализа с применением меченых биозондов 38
1.1.6. Форматы твердофазных иммунохимических тестов 50
1.1.6.1. Тесты, выполняемые в планшетах для иммунологических реакций 50
1.1.6.2. Иммунохимические тесты, выполняемые на плоских ,. подложках
1.1.6.3. Быстрые иммунохимические тесты, основанные на фильтрации 59
1.1.6.4. Иммунохимический анализ, выполняемый с , применением микрочастиц
1.1.6.5. Иммунохимический анализ, выполняемый на белковых , матрицах
1.1.6.6. Иммуносенсоры 71
1.2. Методы оценки результатов иммунодиагностических тестов 76
1.3. Стратегии применения иммунодиагностических тестов 78
1.3.1. Иммунодиагностическое обследование в специализированных клинических лабораториях 78
1.3.2. Иммунодиагностическое обследование, выполняемое в слабооснащенных медицинских учреждениях 79
1.3.3. Иммунодиагностическое обследование в кабинете врача и на дому
1.3.4. Специфическая индикация биологических угроз 83
1.4. Подходы к разработке новых иммунодиагностических тестов 89
1.5. Заключение 93
Глава 2. Материалы и методы 97
Глава 3. Разработка планшетного варианта иммуноанализа с визуальным учетом результатов на основе применения в качестве маркеров золей каталитически активных соединений металлов 107
3.1. Предпосылки создания иммунокаталитического теста 107
3.2. Железосодержащие золи 113
3.2.1. Получение железосодержащих золей 113
3.2.2. Оценка эффективности применения железосодержащих золей... 114
3.3. Золи серебра 121
3.3.1. Получение серебряных золей и исследование их структурно-дисперсных характеристик 121
3.3.2. Стабилизация серебряных золей 126
3.3.3. Проявление серебряных золей 129
3.3.4. Оценка эффективности применения серебряных золей 132
3.4. Кобальтсодержащие золи 135
3.4.1. Получение и свойства кобальтсодержащих иммунозолей 135
3.4.2. Проявление кобальтсодержащих иммунозолей 138
3.4.3. Оптимизация условий проведения анализа 148
3.4.4. Оценка эффективности применения кобальтсодержащих золей 156
Глава 4. Разработка и усовершенствование быстрых и простых тестов на пористых подложках с применением корпускулярных маркеров
4.1. Экспрессное иммунофильтрационное выявление антител и антигенов вируса Эбола с применением иммунозолей золота и усиления сигнала физическим проявлением 163
4.1.1. Задачи и условия экспериментов 163
4.1.2. Иммунофильтрационное выявление антител 166
4.1.3. Иммунофильтрационное выявление антигена 167
4.2. Прямое выявление антигенов Yersinia pestis в дот-иммуноанализе на белковых матрицах с обратной фазой с применением иммунозолей серебра 169
4.3. Прямое выявление специфических антител в дот-иммуноанализе с применением иммуносуспензий на основе углеродных маркеров 172
4.3.1. Задачи и условия экспериментов 172
4.3.2. Выявление антител к вирусу паротита с использованием маркеров на основе активированного угля и графитированной сажи 175
4.3.3. Выявление противобруцеллезных антител в сыворотке крови экспериментальных животных с использованием маркеров на основе активированного угля 180
4.3.4. Выявление антител к Treponema pallidum с использованием маркеров на основе норита 181
4.3.5. Выявление биотинилированных белков с применением
маркеров на основе угля, импрегнированного серебром 184
4.3.6. Сравнение чувствительности выявления IgG в ИФА и дот-
иммуноанализе с использованием маркеров на основе коллоидного
золота, активированного угля и угля, импрегнированного серебром... 186
Глава 5. Разработка технологических подходов к конструированию и применению белковых матриц для многопрофильного иммуноанализа с использованием каталитических маркеров 190
5.1. Предпосылки создания многопрофильного теста и постановка задачи 190
5.2. Выбор формата многопрофильного теста 192
5.3. Многопрофильный анализ антигенов 194
5.4. Многопрофильное выявление антител 200
5.4.1. Выбор и исследование свойств материалов для подложки 202
5.4.2. Отработка способов подготовки поверхности подложки 208
5.4.3. Подбор антигенов для изготовления матрицы 212
5.4.4. Выбор способа и условий иммобилизации антигенов на подложке 219
5.4.5. Отработка автоматизированного способа нанесения антигенов... 223
5.4.6. Выбор системы детекции 228
5.4.7. Оптимизация состава и условий применения физического проявителя 231
5.4.8. Оптимизация условий выполнения многопрофильного анализа 235
5.4.9. Испытания лабораторного образца теста для многопрофильного анализа антител 239
5.4.10. Разработка средств инструментального учета результатов теста 248
5.4.11. Разработка прототипа набора реагентов для многопрофильного анализа 255
Заключение 261
Выводы 264
Литература 266
