Введение
Культура трансформированных клеток, как модель для изучения биологической активности веществ 7
Индуцированная гибель и изменение количества трансформированных клеток 10
Понятие цитолитического процесса 10,
Механизмы клеточной гибели 11
Цитолитические процессы 13
Понятие пролиферативного процесса 14
Регуляция пролиферативных процессов в многоклеточном организме 75
Механизмы рецепторной передачи сигнала, 17
Белки, регулирующие пролиферацию 18
Факторы роста 18
Цитокины 20
Гены, регулирующие пролиферативные и цитолитические процессы 21
Действие "классических" регуляторных пептидов на трансформированные клетки 24
Опиоидные пептиды : . 25
Бомбезин и бомбезинподобные пептиды 27
Соматостатин и его аналоги 29
Вазоактивный интестинальный пептид и его аналоги 31
Лигандыгастрин/холецистокининовых рецепторов 33
Нейротензин и его аналоги 34
Веществор 36
Кальцитонин 37
Лютеинизин высвобождающий гормон (lh-rh) и его аналоги 37
Гонадотропин-высвобождающий гормон (gh-rh) 38
Вазопрессин 39
Заключение 40
Фрагменты протеолитической деградации функциональных белков 40
Происхождение фрагментов функциональных белков 40
Фрагменты протеолитической деградации функциональных белков, выделенные из экстрактов тканей животных 41
Фрагменты функциональных белков, секретируемые клетками in vitro 42
Фрагменты, образующееся в результате протеолитической обработки различных белков и тканей in Vitro 42
Синтетические фрагменты функциональных белков 43
Биологическая активность фрагментов функциональных белков 44
Механизмы действия фрагментов функциональных белков 46
Рецепторные мишени фрагментов протеолитической деградации фугікциогіальньгх белков 46
Действие фрагментов функциональных белков на ионные каналы , 47
Действие фрагментов функциональных белков на систему внутриклеточной передачи сигнала 48
Действие фрагментов протеолитической деградации функциональных белков на культуры трансформированных и нормальных клеток 48
Эффекты фрагментов протеолитической деградации функциональных белков на культурах нормальных клеток 48
Эффекты фрагментов протеолитической деградации функциональных белков на культурах трансформированных клеток 50
Заключение 51
Результаты и обсуждение 52
Протеолиз гемоглобина in vivo 53
Внутриэритроцитарный протеолиз гемоглобина 53
Фрагменты гемоглобина, секретируемые эритроцитами 54
Протеолиз гемоглобина в тканях 55
Заключение 55
Первичная оценка биологической активности фрагментов гемоглобина, присутствующих в различных тканях млекопитающих . 59
Биологическая активность вргутриэритроцитарных пептидов 62
Биологическая активность фрагментов гемоглобина, экскретируемых эритроцитами 65
Биологическая активность фрагментов гемоглобина, представленных в экстрактах тканей млекопитающих 66
Заключение 70
Эффекты пептидов стимулирующих пролиферацию трансформированных клеток 71
Стимуляция пролиферации трансформированных клеток в присутствии факторов роста 71
Восстановление пролиферации клеток костного мозга после обработки цитостатическим препаратом 72
Исследование антипролиферативньгх эффектов пептидов семейства геморфинов 75
Цитотоксическая активность геморфинов в культуре трансформированных клеток 75
Изучение цитолитического и антипролиферативного действия уу*-геморфина-5 методом проточной цитофлюориметрии 80
Сравнение противоопухолевой активности \л/-геморфина-5, с эффектами селективных лигандов опиатных рецепторов 83
Изучение пролонгированного онколитического действия уу-геморфина-5 84
Изучение суммарной онколитической активности уу-геморфина-5 при неоднократном добавлении препарата 86
Противоопухолевая активность w-геморфина-5 в панели трансформированных клеток 87
Биологическая активность геморфинов в первичной культуре нормальных клеток 89
Заключение 91
Материалы и методы 97
Используемые линии клеток 97
Культивирование клеток 98
Исследуемые вещества 99
Общая характеристика исследуемых веществ 99
Концентрации исследуемых веществ 700
Приготовление раствора исследуемого вещества 700
Растворы исследуемых пептидов (фрагменты гемоглобина, met-энкефалин и tnf (фактор некроза опухолей)).. 100
Расгторзтафубицщіаинейротокстаїап^іадакобримаіаїлазаохіапа) \00
Определение цитолитической активности 100
Определение цитолитической активности в отношении клеток линии к562 700
Определение цитолитической активности в культуре трансформированных клеток l929 707
Определение изменения количества клеток 101
Определение изменения количества клеток визуально под микроскопом 707
Определение количества клеток при окрашивании мтт 702
Определение количества клеток при окрашивании сульфородамином б. 102
Клоногенный тест 103
Определение активности фрагментов гемоглобина в культурах нормальных клеток 104
Выделение клеток селезенки и костного мозга мыши 104
Определение аюпивности фрагментов гемоглобина в перелсиеающей культуре клеток костного мозга
Мыши 104
Определение активности фрагментов гемоглобина в перелсиеающей культуре клеток костного мозга
Мыши 105
Определение активности фрагментов гемоглобина в перелсиеающей культуре сплепоцитов мыши... 105
Определение фрагментации днк 106
Определение количества клеток и анализ днк с помощью проточного флуориметра 107
Определение количества клеток. 707
Определение содержания днк. 70s
Статистическая обработка результатов 108
Выводы 109
Список литературы
