Введение
1 Обзор литературы 11
1.1 Характеристика Serratia marcescens 11
1.2 Бактериальный пигмент продигиозин 18
1.2.1 Биосинтез продигиозина 20
1.2.2 Питательные среды и условия культивирования 9 оптимальные для биосинтеза продигиозина
1.2.3 Локализация пигмента в клетках S. marcescens 30
1.2.4 Методы экстракции и идентификации продигиозина 30
1.2.5 Биологическое значение продигиозина в жизни продуцента и практическое использование ~9
1.2.6 Цитотоксичность продигиозина 36
1.3 Продигиозинподобные пигменты 40
1.4 Биологические маркеры для нефтепродуктов 42
1.5 Стратегия исследований генотоксичности соединений 46
Заключение 48
Экспериментальная часть 51
2 Материалы и методы 51
2.1 Объекты исследования 51
2.2 Использованные материалы 52
2.3 Условия культивирования, определение продуктивности 55
2.4 Определение концентрации продигиозина 55
2.5 Получение продигиозина и его экстракционная очистка 56
2.6 Очистка пигментного препарата 56
2.6.1 Жидкостная хроматография 5 6
2.6.2 Тонкослойная хроматография (ТСХ) 57
2.7 Физико-химические методы анализа очищенного продигиозина 57
2.8 Оценка антагонистической активности Serratia marcescens 58
2.9 Оценка фунгицидной активности препаратов продигиозина 58
2.10 Методы оценки токсичности 58
2.10.1 Оценка влияния препаратов продигиозина на рост корней растении
2.10.2 Оценка влияния препаратов продигиозина на накопление биомассы растений
2.10.3 Определение острой летальной токсичности на тест-объекте Paramecium caudatum
2.11 Методы оценки генотоксичности 62
2.11.1 Тест на токсичность по отношению к Salmonella typhimurium 62
2.11.2 Полуколичественный метод учета генных мутаций (тест „ Эймса)
2.11.3 Микроядерный тест на эритроцитах , периферической крови мышей in vivo
2.12 Маркирование и идентификация маркированных , нефтепродуктов
2.13 Статистическая обработка результатов 66
3 Результаты исследований 67
3.1 Подбор высокопродуктивных штаммов 67
3.1.1 Сравнительная характеристика роста и пигментообразования исследуемых штаммов S. marcescens
3.2 Подбор оптимальной питательной среды 70
3.2.1 Образование продигиозина при 7П культивировании бактерий на различных средах
3.2.2 Рост и образование продигиозина 79 Serratia marcescens на модифицированной среде Кинга А
3.2.3 Рост и образование продигиозина Serratia marcescens на модифицированной пептон-глицериновой среде
3.3 Определение оптимального количества посевного материала 76
3.4 Подбор метода экстракции пигмента из клеток 77
3.5 Выделение и очистка пигментного препарата продигиозина, его характеристика
3.5.1 Жидкостная хроматография 79
3.5.2 Тонкослойная хроматография 82
3.6 Продигиозин, как фактор антагонистической активности S.marcescens
3.6.1 Антагонистическая активность S. marcescens 85
3.6.2 Характеристика роста фитопатогенных микромицетов на питательных средах с добавлением пигментных препаратов
3.7 Токсическое воздействие препаратов продигиозина на прорастание семян и накопление биомассы растений
3.8 Определение острой летальной токсичности на тест-объекте Paramecium caudatum
3.9 Токсические эффекты продигиозина по отношению к микроорганизмам
3.10 Индукция генных мутаций пигментными препаратами Эймса
3.11 Микроядерный тест на эритроцитах периферической крови мышей in vivo
3.12 Возможное практическое применение продигиозина
3.12.1 Маркирование нефтепродуктов продигиозином и способ идентификации маркированных нефтепродуктов
4 Обсуждение результатов
Выводы
Благодарности
Литература
Приложение
