Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы . 12
1.1 Биологические особенности возбудителя сибирской язвы 12
1.2 Сибиреязвенные бактериофаги и их биологические свойства . 13
1.3 Практическое применение сибиреязвенных бактериофагов . 19
1.3.1 Возможность использования бактериофагов для дезинфекции почвенных очагов и лечения сибирской язвы . 19
1.3.2 Использование бактериофагов в тестах индикации Bacillus an-thracis 20
1.3.3 Идентификационные тесты с применением сибиреязвенных бактериофагов 22
1.4 Способы производства препаратов бактериофага 25
1.5 Механизмы фагочувствительности и фагорезистентности штаммов Bacillus anthracis 29
Экспериментальная часть
ГЛАВА 2. Материалы и методы 34
2.1 Материалы 34
2.1.1 Бактериофаги 34
2.1.2 Штаммы возбудителя сибирской язвы и близкородственных представителей рода Bacillus 34
2.1.3 Питательные среды 38
2.1.4 Химические реактивы 38
2.1.5 Аппаратура 39
2.2 Методы исследования 39
2.2.1 Методы изучения фенотипических свойств сибирской язвы 39
2.2.1.1 Тест на обнаружение капсулы in vitro 39
2.2.1.2 Метод выращивания спор B. anthracis на среде Гладстона-Филдса . 40
2.2.1.3 Приготовление взвесей B. anthracis . 40
2.2.1.4 Определение концентрации жизнеспособных спор сибиреязвенного микроба . 41
2.2.2 Методы размножения и изучения свойств сибиреязвенных бактериофагов 41
2.2.2.1 Метод получения (размножения) бактериофага сибиреязвенного Гамма А-26 42
2.2.2.2 Метод определения концентрации фаговых частиц 42
2.2.2.3 Определение чувствительности культур к специфическим бактериофагам 43
2.2.2.4 Методы оценки специфической активности бактериофагов 44
2.2.2.5 Метод определения нарастания титра бактериофага (РНФ) . 45
2.2.3 Методы статистической обработки результатов 46
ГЛАВА 3. Разработка биотехнологии производства препарата бактериофага диагностического сибиреязвенного гамма а-26 жидкого 47
3.1 Подбор штамма B. anthracis для размножения сибиреязвенного бактериофага 48
3.2 Разработка оптимальных параметров репродукции бактериофага сибиреязвенного Гамма А-26 54
3.3 Сравнительная характеристика экспериментально-производственных серий бактериофага диагностического сибиреязвенного Гамма А-26 жидкого 64
ГЛАВА 4. Сравнительная характеристика биологических свойств сибиреязвенных бактериофагов 68
4.1 Сравнительная оценка свойств сибиреязвенных бактериофагов, определяющих их пригодность для промышленного производства 68
4.2 Определение спектра специфической литической активности сибиреязвенных бактериофагов 75
4.3 Изучение специфичности диагностических бактериофагов Bacillus anthracis 86
ГЛАВА 5. Оптимизация использования различных сибиреязвенных бактериофагов для совершенствования лабораторной диагностики сибирской язвы . 91
5.1 Изучение возможности использования видоспецифического сибиреязвенного бактериофага R/D-Ph-6 для индикации возбудителя B. anthracis в РНФ . 91
5.1.1 Изучение динамики изменения концентрации B. anthracis и сибиреязвенного бактериофага R/D-Ph-6 при культивировании в бульонной культуре 92
5.1.2 Подбор оптимальных условий для получения высоких концентраций бактериофага R/D-Ph-6 при размножении на чистых культурах B. anthracis 95
5.1.3 Испытание специфической активности бактериофага R/D-Ph-6 в РНФ на различных штаммах сибиреязвенного микроба . 97
5.1.4 Изучение специфичности бактериофага R/D-Ph-6 в РНФ на различных штаммах сапрофитных представителей рода Bacillus 99
5.1.5 Изучение специфической активности бактериофага R/D-Ph-6 в РНФ в смешанных культурах 100
5.1.6 Изучение специфической активности бактериофага R/D-Ph-6 в РНФ на пробах из объектов окружающей среды 102
5.2 Изучение возможности повышения эффективности фагодиа-
гностики сибирской язвы при комплексном использовании бактериофагов с различным литическим спектром 103
5.2.1 Выделение фагорезистентных сибиреязвенных культур и определение их чувствительности к различным бактериофагам 103
5.2.2 Разработка оптимальной схемы комплексного применения сибиреязвенных бактериофагов с различным спектром специфической активности для идентификации и фаготипирования штаммов B. anthracis . 108 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 115
Список сокращений и условных обозначений 129
Список литературы . 130
