Введение
ГЛАВА 1. Материалы и методы 46
1.1. Препараты 46
1.2. Лабораторные животные 48
1.3. Штаммы S. pneumoniae 48
1.4. Получение иммунных мышиных сывороток к S. 48 pneumoniae серотипа 14
1.5. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) 48
1.6. Иммунизация мышей 50
1.7. Определение экспрессии Толл-подобных рецепторов 50
1.8. Культивирование дендритных клеток 51
1.9. Анализ фенотипа дендритных клеток 52
1.10. Уровень цитокинов 52
1.11. Бактерицидная активность лейкоцитов 52
1.12. Характеристика поверхностных антигенов мононуклеарных лейкоцитов селезенки мышей 53
1.13. Протективная активность 54
1.14. Превентивная активность сыворотки 54
1.15. Опсонизирующая активность сыворотки 55
1.16. Методы статистической обработки данных 55
ГЛАВА 2. Сравнительное изучение антигенной активности тетра-, гекса- и октасахарида 56
2.1. Ингибирование антител к капсульному полисахариду S.pneumoniae серотипа 14 синтетическими олигосахаридами с разной длиной цепи 56
2.2. Исследование способности специфических антител к бактериальному капсульному полисахариду связывать тетра-, гекса и октасахарид в составе биотинилированных конъюгатов 59
2.3. Отработка условий для разработки экспериментальной ИФА тест-системы на основе конъюгированного гексасахарида 64
.3.1. Выбор оптимальной концентрации гексасахарида, конъюгированного с БСА, для сорбции на планшетах 64
2.3.2. Специфичность конъюгированного гексасахарида, 65
сорбированного на планшете
ГЛАВА 3. Активация врожденного иммунитета синтетическим гексасахаридом, конъюги рованнымсбса 68
3.1. Действие конъюгированного гексасахарида на экспрессию Толл подобных рецепторов 68
3.2. Влияние конъюгированного гексасахарида на фенотип
дендритных клеток и продукцию ими цитокинов 71
3.3. Влияние конъюгированного гексасахарида на уровень цитокинов в сыворотке крови мышей 75
3.4. Бактерицидная активность сыворотки крови мышей, иммунизированных конъюгированным гексасахаридом 77
ГЛАВА 4. Активация адаптивного иммунитета синтетическим гексасахаридом, конъюгиро ваннымсбса 80
4.1. Антительный ответ к капсульному полисахариду при иммунизации конъюгированным гексасахаридом 80
4.2. Протективная активность конъюгированного гексасахарида в отношении S. pneumoniae серотипа 14 85
4.3. Превентивные свойства сыворотки крови мышей, иммунизированных конъюгированным гексасахаридом, сорбированным на гидроксиде алюминия 88
4.4. Опсонизирующая активность сыворотки мышей, иммунизированных конъюгатом гексасахарида 91
4.5. Действие конъюгированного гексасахарида на иммунофенотип мононуклеарных лейкоцитов мышей 92
Заключение 97
Выводы 105
Алгоритм оценки иммунологической активности синтетических олигосахаридов 1 7
Литература
