Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1 Вирусологические и патогенетические аспекты простого герпеса 12
1.2 Механизмы ускользания ВПГ от противовирусного надзора 15
1.3 Система интерферонов I типа в противовирусной защите 20
1.4 NK-клетки 25
1.4.1 Характеристика NK-клеток 25
1.4.2 NK-клетки и ВПГ-инфекция 33
1.4.3 Современные методы исследования функциональной активности NK-клеток: оценка дегрануляции NK-клеток. 35
1.5 Современные подходы к терапии простого герпеса 39
1.5.1 Ациклические нуклеозиды 39
1.5.2 Вакцинотерапия 47
1.5.3 Иммуномодулирующая терапия 49
Глава 2. Материалы и методы 54
2.1 Пациенты и доноры 54
2.2 Реактивы, расходные материалы и оборудование 57
2.2.1 Реактивы для культуральных работ 57
2.2.2 Моноклональные антитела 57
2.2.3 Флюоресцентные красители 57
2.2.4 Прочие реактивы для иммунофлюоресцентной окраски клеток 58
2.2.5 Реагенты для выделения РНК, обратной транскрипции и ПЦР в реальном времени 58
2.2.6 Реагенты для гель-электрофореза 59
2.2.7 Расходные материалы 59
2.2.8 Оборудование 59
2.3 Забор крови и выделение мононуклеарных клеток 60
2.4 Культивирование клеток K562 61
2.5 Определение дегрануляции NK-клеток по экстернализации CD107a 61
2.6 Определение NK-активности МНК 62
2.7 Стимуляция МНК рекомбинантным ИФН–2b 63
2.8 Оценка уровней ИФН- в супернатантах стимулированных вирусом клеток методом иммуноферментного анализа (интерфероновый статус) 64
2.9 Выделение РНК 65
2.10 Спектрофотометрия 65
2.11 Гель-электрофорез 66
2.12 Обратная транскрипция 67
2.13 ПЦР в реальном времени 67
2.14 Статистическая обработка результатов 68
ГЛАВА 3. Результаты исследования 69
3.1 Клиническая характеристика пациентов с ЧРПГ 69
3.2Результаты оценки состояния системы «NK-клетка / ИФН I типа» у пациентов с ЧРПГ и у здоровых доноров 73
3.2.1 Оценка влияния ИФН- на дегрануляцию NK-клеток у здоровых доноров. 73
3.2.2 Оценка влияния ИФН- на дегрануляцию NK-клеток у пациентов с ЧРПГ 78
3.2.3 Оценка влияния ИФН- на цитотоксическую активность NK-клеток (NK-активность) у здоровых доноров и пациентов с ЧРПГ 85
3.2.4 Оценка особенностей синтеза ИФН- мононуклеарными клетками крови в ответ на вирусные индукторы у пациентов с различными вариантами ответа NK-клеток на стимуляцию рекомбинантным ИФН- 91
3.2.5 Оценка экспрессии ИФН-индуцибельных генов с противовирусной функцией OAS1 и Mx1 у пациентов с ЧРПГ и у здоровых доноров 97
ГЛАВА 4. Обсуждение 101
Заключениe 119
Выводы 120
Практические рекомендации 121
Список литературы 122
