Введение
1. Введение 4
1.1. Актуальность темы 4
1.2. Цель и задачи исследования 4
1.3. Научная новизна 5
1.4. Практическая значимость работы. 6
1.5. Вид и формы внедрения в практику 6
2. Обзор литературы 7
2. 1. Введение 7
2.1.1. Генетический контроль туберкулезной инфекции 7
2.2. Генетика туберкулеза человека 7
2.2.1. Общие положения 7
2.2.2. Гены, контролирующие восприимчивость к туберкулезу у человека 9
2.2.3. Генетика экспериментального туберкулеза 16
2.2.3.1. Общие положения 16
2.2.3.2.Два подхода к исследованию генетики туберкулеза на мышах 16
2.2.3.3. Гены, участвующие в контроле туберкулеза у мышей, выявленные методом «обратной генетики» 17
2.2.3.4. Ген xid (btk) 21
2.2.3.5 Гены предрасположенности к туберкулезу у мышей, выявленные методом «прямой генетики» 22
2.2.3.5.1. Ген Sc11a1 (по старой номенклатуре Nramp1) 22
2.2.3.5.2. Ген Ipr1 24
2.2.3.5.3 Локусы Trl-1, Trl-2, Trl-3 и Trl-4 25
2.2.3.5.4. QTL на 3, 9 и 17 хромосомах 26
3. Материалы и методы 29
3.1. Животные и выведение рекомбинантных конгенных линий мышей 29
3.2. Выделение ДНК 29
3.3. Генетическое типирование 30
3.4. Заражение и параметры инфекции 32
3.5.Подсчет колоний микобактерий (CFU) 32
3.6. Приготовление суспензии легких и проточная цитофлуориметрия 32
3.7. Продукция цитокинов. 33
3.8. Гистологические исследования. 33
3.9. Постановка пролиферативного теста 34
3.10. Выделение РНК и получение кДнк 34
3.11. Определение экспрессии генов методом ПЦР в реальном времени 35
3.12. Клонирование генов-кандидатов 35
3.13. Определение экспрессии генов с помощью ДНК-микрочипов Illumina 36
3.14. Статистическая обработка результатов 36
4. Результаты 37
4.1. Выведение новых рекомбинантных линий мышей, конгенных по МНС 37
4.2. Локус tbs-3 влияет на разные фенотипы 39
4.3. Исследование роли полиморфизма TNF- в течении инфекции 43
4.4. Тонкое генетическое картирование участка МНС, содержащего ген-кандидат 44
4.5. Генотипические и фенотипические характеристики новой линии B6.I-9.5.7 47
4.6. Исследование клеточного состава легких при инфекции 50
4.7. Линия мышей В6 несет доминантный аллель, определяющий резистентность к инфекции 51
4.8. Анализ экспрессии генов в нормальной и зараженной легочной ткани линий 52
4.9. Сужение области генома, несущей ген(ы) –кандидат(ы) 55
4.10. Сравнение параметров течения ТБ у мышей линий B6.I-249.1.15.100 и родительских линий 56
4.11. Позиционное клонирование в области 17:34,243371 - 34,341959 59
5. Обсуждение 62
6. Выводы 65
7. Список сокращений 66
8. Список литературы
