Введение
Глава 1. Активаторы глюкокиназы – перспективный класс противодиабетических средств (обзор литературы) 14
1.1 Основные группы препаратов для лечения сахарного диабета 2 типа 14
1.2 Роль глюкокиназы печени и поджелудочной железы в обмене глюкозы 21
1.3 Изменения конформации глюкокиназы 23
1.4 Значение глюкокиназы в регуляции массы -клеток 24
1.5 Изменение активности глюкокиназы при сахарном диабете 25
1.6 Мутации гена глюкокиназы 25
1.7 Активаторы глюкокиназы – новое, перспективное направление терапии сахарного диабета 2 типа 28
1.8 Заключение 34
Глава 2. Материалы и методы исследования 35
2.1 Правила и рекомендации к проведению экспериментальных исследований 35
2.2 Перечень используемых реактивов и веществ 35
2.3 Список используемого оборудования и программного обеспечения 39
2.4 Экспериментальные животные 40
2.5 Методы компьютерной обработки информации 41
2.6 Скрининговые модели и методы для изучения фармакологических свойств новых производных азотсодержащих гетероциклических соединений 49
2.7 Методы оценки зависимости фармакологической активности изучаемых соединений от их химической структуры 50
2.8 Методы исследования антидиабетической активности соединений при хроническом введении 51
2.9 Метод изучения влияния активаторов глюкокиназы на процессы регенерации -клеток островков Лангерганса поджелудочной железы при стрептозотоцин-индуцированном диабете с помощью метода флуоресцентной микроскопии 57
2.10 Исследование влияния соединений на механизмы развития поздних осложнений сахарного диабете 60
2.11 Методы исследования токсикологических свойств соединений 67
2.12 Методы статистической обработки 70
Глава 3. Поиск и консенсусный прогноз соединений с глюкокиназной активностью in silico 72
3.1 Формирование базы данных по структуре новых соединений 72
3.2 Создание банка данных по структуре и уровню активности известных активаторов глюкокиназы 72
3.3 Консенсусный прогноз соединений с глюкокиназной активностью in silico 74
3.4 Заключение 88
Глава 4. Поиск новых активаторов глюкокиназы in vitro 90
4.1 Поиск новых активаторов глюкокиназы в тест-системе in vitro 90
4.2 Влияние наиболее активных соединений на активность глюкокиназы в зависимости от концентрации in vitro 100
4.3 Исследование взаимосвязи между структурой и фармакологической активностью изучаемых соединений 102
4.4 Механизм молекулярного взаимодействия соединений NP-001 и NP-006 с активным аллостерическим сайтом глюкокиназы 104
4.5 Заключение 107
Глава 5. Антигипергликемические свойства наиболее активных соединений 109
5.1 Влияние на углеводный обмен наиболее активных соединений при однократном введении интактным животным 109
5.2 Заключение 112
Глава 6. Влияние соединений NP-001 и NP-006 на процессы пролиферации - и -клеток островков лангерганса поджелудочной железы при стрептозотоцин индуцированном сахарном диабете 1 типа 114
6.1 Исследование влияния соединения NP-001 и NP-006 на пролиферацию -и -клеток поджелудочной железы на модели экспериментального стрептозотоцин-индуцированного сахарного диабета I типа у мышей. 115
6.2 Заключение 118
Глава 7. Моделирование сахарного диабета 2 типа высокожировой диетой (ВЖД) на мышах линии C57BL/6J 119
7.1 Влияние высокожировой диеты на уровень глюкозы и динамику веса мышей линии C57BL/6J при моделировании сахарного диабета 2 типа 120
7.2 Заключение 123
Глава 8. Антидиабетическая активность соединений NP 001 и NP-006 при хроническом введении 124
8.1 Исследование антидиабетической активности соединений NP-001 и NP-006 при хроническом введении 124
8.2 Заключение 144
Глава 9. Влияние соединений NP-001 и NP-006 на механизмы развития поздних осложнений сахарного диабета 147
9.1 Антиоксидантные свойства соединений NP-001 и NP-006 на моделях in vitro 147
9.2 Антигликирующее действие изучаемых соединений на моделях in vitro 149
9.3 Изучение хелатирующих свойств соединений на модели медь-индуцированного аутоокисления аскорбиновой кислоты in vitro 150
9.4 Антиагрегантное действие наиболее активных веществ на моделях in vitro 152
9.5 Антитромбогенное действие наиболее активных веществ на моделях in vivo 153
9.6 Заключение 155
Глава 10. Токсикологические и фармакокинетические свойства соединений NP-001 и NP-006 158
10.1 Оценка in silico показателей ADMEТ 158
10.2 Исследование цитотоксических свойств соединений NP-001 и NP-006 169
10.3 Изучение острой токсичности соединений при пероральном и интраперитонеальном путях введения 171
10.4 Заключение 172
Глава 11. Обсуждение результатов 174
Выводы 188
Список литературы 193
Приложение 1 214
