Введение
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 8
1.1 Хитин 8
1.2 Хитозан 11
1.2.1 Низкомолекулярный хитозан 13
1.3 Получение низкомолекулярного хитозана 14
1.3.1 Химический способ 14
1.3.2 Физический способ 15
1.3.3 Ферментативный способ 16
1.3.3.1 Хитиназы 19
1.3.3.2 Хитозаназы 22
1.3.3.3 Неспецифическое действие ферментов 24
1.4 Антибактериальная активность хитозана 25
1.4.1 Механизм антибактериального действия хитозана 33
1.5 Применение хитозана 40
Заключение 42
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 43
2.1 Материалы и методы 43
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 56
3.1 Получение низкомолекулярного водорастворимого хитозана 56
3.1.1 Отбор штамма - продуцента хитинолитических ферментов 56
3.1.2 Подбор индуктора синтеза ферментов с высокой хитинолитической активностью 57
3.1.3 Получение низкомолекулярного водорастворимого хитозана 63
3.2 исследование антибактериальных свойств низкомолекулярного водорастворимого хитозана 64
3.2 Л Подбор концентрации хитозана 64
3.2.2 Исследование зависимости процента гибели бактериальных клеток от Mv хитозана 65
3.2.3 Исследование зависимости процента гибели бактериальных клеток от времени взаимодействия их схитозаном 71
3.2.4 Определение прочности связывания хитозана с бактериальными клетками 72
3.2.5 Изучение влияния рН на взаимодействие хитозана с бактериальными клетками 75
3.2.6 Изучение влияния СД на антибактериальную активность хитозана 76
3.2.7 Определение МИК хитозана 78
3.2.8 Исследование антибактериальных свойств хитозана, полученного химическим гидролизом 81
3.2.9. Исследование антибактериальных свойств хитозана с отрицательным зарядом 85
3.2.10 Изучение антибактериального воздействия хитозана на клетки В. subtilis с помощью атомно-силовой микроскопии 87
3.2.11 Исследование содержания АТФ в клетках В. subtilis, обработанных хитозаном 98
3.2.12 Изучение антибактериального воздействия хитозана на клетки KL pneumoniae и S. aureus с помощью трансмиссионной электронной микроскопии 99
Заключение 108
ВЫВОДЫ 112
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 114
