Введение
Глава 1. Обзор литературы 22
1.1 Структура и функции Na/K-ATФазы 22
1.2 Na/K-АТФаза как специфический рецептор для кардиотонических стероидов 30
1.3 Подтипы эндогенных кардиотонических стероидов 33
1.4 Различная чувствительность Na/K-ATФазных изоформ к кардиотоническим стероидам 40
1.5 Стресс и кардиотонические стероиды 41
1.6 Расстройства настроения и активность Na/K-ATФазы 42
1.7 Этанол и нейротрансмиттерные системы 45
1.8 Абстиненция и зависимость 54
1.9 Алкогольная зависимость и Na/K-АТФаза 56
1.10 Новые терапевтические возможности 57
1.11 Модулирование оуабаин-зависимого рецепторного сайта Na/K-ATФазы 62
1.12 Современная лекарственная терапия алкогольной зависимости 63
Глава 2. Материалы и методы 71
2.1 Экспериментальные животные 71
2.2 Препараты 72
2.3 Измерение активности Na/K-АТФазы и концентраций биологически активных веществ 73
2.3.1 Методы определения активности Na/K-АТФазы в эритроцитах 73
2.3.2 Подготовка и определение активности Na/K-АТФазы в клетках почек 74
2.3.3 Методы определения концентраций маринобуфагенина и оуабаина в моче и плазме крови 75
2.3.4 Получение и очистка маринобуфагенина 76
2.3.5 Методы определения концентраций вазопрессина в плазме крови 76
2.3.6 Метод определения концентрации натрия в моче 77
2.4 Подготовка и проведение количественное определение экспрессии белка 78
2.4.1 Метод получения изолированных фибробластов сердца крыс 78
2.4.2 Вестерн-блот анализ (Western Blot Analysis, иммуноблоттинг) 79
2.4.3 Вестерн-блот анализ коллагена-1 80
2.4.4 Оценка синтеза коллагена по включениям (3Н)пролина 81
2.4.5 Определение активности протеинкиназы С дельта (ПКС) в ядре и цитозоле клеток 82
2.5 Методы поведенческой фармакологии 82
2.5.1 Методика свободного потребления алкоголя в двухбутылочном тесте 82
2.5.2 Методика рецидива, основанная на эффекте депривации от этанола 83
2.5.3 Метод оценки дискриминативных стимульных свойств «классических» опиатов 84
2.5.4 Оценка двигательной активности в экспериментальных боксах для автоматической регистрации локомоторной активности (актометр), как модель неподкрепляемого поведения 87
2.5.5 Оценка двигательной активности в беговом колесе (running wheel) как модель подкрепляемого поведения 88
2.5.6 Метод выработки и поддержания реакции свободного потребления этанола в оперантных камерах 88
2.5.7 Внутримозговая имплантация электродов у крыс 90
2.5.8 Процедура внутримозговой самостимуляции системы «награды» 91
2.5.9 Процедура неинвазивного измерения систолического артериального давления у крыс 93
2.6 Методы статистического анализа результатов 94
Глава 3. Результаты и их обсуждение 95
3.1 Спиронолактон и канренон являются конкурентами маринобуфагенина за связь с Na/K-АТФазой 95
3.1.1 Эффект маринобуфагенина на экспрессию коллагена в фибробластах сердца крыс 96
3.1.2 Эффект блокады Na/K-АТФазного «сигналинга» на МБГ-индуцированную экспрессию коллагена 97
3.1.3 Влияние канренона на способность МБГ ингибировать активность Na/K-АТФазы 99
3.1.4 Спиронолактон и канренон препятствуют развитию МБГ индуцированного фиброза 101
3.1.5 Влияние канренона на функциональное состояние МБГ-зависимой активности Na/K-АТФазы 106
3.1.6 Влияние канренона на активность эритроцитарной Na/K-АТФазы у больных ХПН 108
3.1.7 Обсуждение результатов 110
3.2. Стадия инициации и поддержания потребления алкоголя 116
3.2.1 Выработка и поддержание свободного потребления этанола в двухбутылочном тесте 117
3.2.1.1 Влияние спиронолактона на потребление этанола у крыс 118
3.2.1.2 Влияние канренона на потребление этанола у крыс 119
3.2.1.3 Влияние оуабаина на потребление этанола у крыс 121
3.2.2 Выявление индивидуальной чувствительности крыс к этанолу на фоне введения спиронолактона 122
3.2.3. Маринобуфагенин и индивидуальная чувствительность крыс к алкоголю 126
3.2.3.1. Корреляция между свободным употреблением алкоголя и исходной концентрацией МБГ в моче у крыс 126
3.2.3.2. Влияние спиронолактона на корреляцию между свободным употреблением алкоголя и экскрецией МБГ у крыс 128
3.2.4 Влияние модуляторов натриевого насоса на выработку и поддержание реакции свободного потребления этанола в оперантных камерах 130
3.2.5 Влияние спиронолактона на систолическое артериальное давление у алкоголизированных крыс 134
3.2.6 Влияние спиронолактона на активность Na/K-АТФазы у алкоголизированных крыс 136
3.2.7 Влияние введения СПН на экскрецию маринобуфагенина у крыс 138
3.2.8 Экскреция натрия на фоне потребления алкоголя и введения спиронолактона у крыс 142
3.2.9 Оценка влияния спиронолактона на локомоторную активность у крыс 147
3.2.9.1 Оценка локомоторной активности крыс в установке «актометр» на фоне введения спиронолактона 147
3.2.9.2 Оценка локомоторной активности на фоне введения спиронолактона в тесте «вращения колеса» (running wheel) у крыс 149
3.2.10 Исследование влияния канренона на дифференцировочные стимульные свойства морфина и буторфанола 151
3.2.11 Исследование влияние канренона на пороги реакции электрической самостимуляции головного мозга крыс 156
3.2.11.1 Влияние различных доз этанола на пороги электрической самостимуляции у крыс 156
3.2.11.2 Изучение влияния канренона на пороги самостимуляции 156
3.2.11.3 Изучение влияния канренона на вызванное этанолом снижение порогов самостимуляции 157
3.2.12 Выработка и поддержание свободного потребления 0,1% раствора сахарина в двухбутылочном тесте 159
3.2.13 Обсуждение результатов 161
3.3. Стадия повторной инициации потребления алкоголя (рецедив, “relapse”) 166
3.3.1 Оценка влияния спиронолактона на депривационный эффект алкоголя у крыс 166
3.3.2 Восстановление угашенной оперантной реакции, вызванной стимулами, ранее ассоциированными с предъявлением этанола 176
3.3.3 Обсуждение результатов 178
3.4. Стадия алкогольного абстинентного синдрома 182
3.4.1 Иммунобиохимические изменения при алкогольном абстинентном синдроме у крыс, методика форсированного введения 20% раствора этанола 182
3.4.2 Физиологические и биохимические показатели на фоне алкогольного абстинентного синдрома при свободном потреблении этанола у крыс 188
3.4.3 Влияние спиронолактона на физиологические и биохимические показатели на фоне алкогольного абстинентного синдрома у крыс 194
3.4.4 Выявление возможного взаимодействия МБГ и вазопрессина у крыс при алкогольном абстинентном синдроме 196
3.4.5 Биохимические и физиологические события при алкогольном абстинентном синдроме у пациетов с диагнозом хронический алкоголизм (пилотное исследование) 199
3.4.6 Обсуждение результатов 202
Заключение 207
Выводы 247
Список литературы 249
