Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Общее описание вируса гриппа 11
1.2. Структура вируса гриппа А 12
1.3. Жизненный цикл вируса гриппа А и роль в нем матриксного белка М1 15
1.4. Структура матриксного белка М1 вируса гриппа А 19
1.5. Взаимодействие матриксного белка М1 вируса гриппа А с липидным бислоем 24
1.6. Плазматическая мембрана 30
1.7. Плоские модельные системы биологических мембран 33
1.8. Адсорбция белков 35
1.8.1. Влияние природы белков на их адсорбцию 36
1.8.2. Влияние водного окружения на адсорбцию белков 39
1.8.3. Влияние свойств поверхности на адсорбцию белков. 41
Глава 2. Материалы и методы 44
2.1. Коммерческие реактивы 44
2.2. Выделение матриксного белка М1 из вирионов и его очистка 44
2.3. Идентификация белка М1 45
2.4. Спектроскопия поверхностного плазмонного резонанса 46
2.4.1. Поверхностный плазмонный резонанс 46
2.4.2. Особенности измерений на ППР-спектрометре «Biosuplar 6» (Mivitec). 50
2.4.3. ППР-спектрометр Biacore T200 (GE Healthcare) 53
2.4.4. Оценка поверхностной концентрации белка 54
2.5. Формирование самособирающихся слоев 56
2.5.1. Создание монослоев тиолов на поверхности ППР-чипов. 56
2.5.2. Создание липидных бислоев на поверхности L1 - чипа (Biacore) 57
2.5.2.1. Приготовление суспензии липосом. 57
2.5.2.2. Иммобилизация липосом на поверхности сенсорного чипа 59
2.5.2.3. Регенерация поверхности чипа. 60
Глава 3. Результаты и обсуждения 61
3.1. Взаимодействие матриксного белка М1 с гидрофильными чипами 61
3.1.1. Влияние рН на формирование слоя белка М1 61
3.1.2 Дезорганизация слоя белка М1 при уменьшении рН среды. 73
3.2. Взаимодействие матриксного белка М1 с гидрофобными чипами 76
3.3. Взаимодействие матриксного белка М1 с липидным бислоем, состоящим из ДФФХ и ДФФС 79
3.3.1. Создание липидных бислоев на гидрофильной полимерной подложке 79
3.3.2. Оценка поверхностной плотности заряда липидной мембраны, состоящей из ДФФХ и ДФФС в различных мольных соотношениях. 83
3.3.3. Формирование слоя белка М1 на липидном бислое при рН 4,7. 87
3.3.4. Формирование слоя белка М1 на липидном бислое при рН 7,0. 91
3.3.4.1. Влияние концентрации белка М1 на формирование слоя при рН 7,0 91
3.3.4.2. Влияние состава липидного бислоя на формирование слоя белка М1 при рН 7,0 . 94
3.3.5. Определение констант связывания белка М1 с липидными бислоями при рН 4,7 и рН 7,0 98
3.3.6. Определение эффективной константы М1-М1 взаимодействия 103
3.3.7. рН-индуцированное разрушение слоя матриксного белка М1 105
Заключение 109
Выводы 114
Благодарности 115
Список используемых сокращений 116
Список литературы 117
