Введение
Глава I. Генетический банк in vitro как способ сохранения биологического разнообразия растительного мира 15
1.1. Основные пути сохранения разнообразия растительного мира, их
преимущества и недостатки 16
1.1.1. Особо охраняемые природные территории 17
1.1.2. Генетические банки
1.1.2.1. Полевые генные банки 18
1.1.2.2. Банки семян 20
1.2. Теоретические основы создания генетического банка in vitro 21
1.2.1. Клональное микроразмножение растений 22
1.2.1.1. Состав питательной среды 25
1.2.1.2. Выбор экспланта 29
1.2.1.3. Введение эксплантов в культуру in vitro 31
1.2.1.4. Собственно микроразмножение 34
1.2.1.5. Укоренение побегов 36
1.2.1.6. Подготовка регенерантов к условиям выращивания in vivo 40
1.2.2. Оценка уровня генетического разнообразия природных популяций 43
1.3. Решение проблемы сохранения биоразнообразия растений флоры
Саратовской области 46
Глава II. Материалы и методы 49
2.1. Объекты исследований 49
2.1.1. Silene cretacea 49
2.1.2. Potentilla volgarica 51
2.1.3. Tulipa gesneriana [= T. schrenkii, T. suaveolens] 52
2.1.4. Другие представители флоры 54
2.2. Методы биотехнолгии растений 57
2.2.1. Базовый состав питательных сред 57
2.2.2. Стерилизация инструментов и растительного материала 58
2.2.3. Условия культивирования и варианты экспериментов 58
2.2.4. Морфо-гистологический анализ 60
2.2.5. Методика укоренения регенерантов 60
2.2.6. Методика адаптации регенерантов к нестерильным условиям 61
2.2.7. Методика изучения семенной продуктивности 61
2.2.8. Методика депонирования для создания коллекции in vitro 62
2.2.9. Статистическая обработка результатов 63
2.3. Инокуляция эксплантов ризобактериями и методы, подтверждающие
колонизацию корней 63
2.3.1. Инокуляция бактериями 63
2.3.2. Микробиологический тест 64
2.3.3. Иммунодиффузия 64
2.3.4. Иммунофлуоресцентное микроскопическое выявление бактерий на корнях растений 65
2.3.5. Иммуноферментное выявление бактерий на корнях растений 65
2.3.6. Морфометрические параметры эксплантов 65
2.4. Молекулярно-генетический анализ 66
2.4.1. Выделение ДНК из растительных тканей 66
2.4.2. Полимеразная цепная реакция 66
2.4.3. Статистическая обработка данных 67
Глава III. Использование методов биотехнологии для сохранения редких и исчезающих видов растений в культуре in vitro 68
3.1. Особенности регенерации побегов Silene cretacea и их последующей адаптации к нестерильным условиям 68
3.1.1. Подбор регуляторов роста 68
3.1.2. Морфогенез 76
3.1.3. Укоренение 78
3.1.4. Адаптация к нестерильным условиям in vivo 81
3.1.5. Обсуждение 81
3.1.6.Заключение 90
3.2. Микроразмножение Potentilla volgarica и семенная продуктивность растений-регенерантов ex vitro 90
3.3. Размножение других охраняемых видов Саратовской области в культуре in vitro 3.3.1. Allium regelianum 99
3.3.2. Tamarix laxa и T. ramosissima 105
3.3.3. Представители семейства Fabaceae 109
3.3.4. Представители семейства Asteraceae 113
3.3.5. Другие представители коллекции 116
3.3.6. Заключение 117
Глава IV. Коллекция редких и исчезающих видов растений саратовской области в условиях замедленного роста 118
4.1. Silene cretacea 118
4.2. Potentilla volgarica 121
4.3. Другие представители флоры 123
4.4. Заключение 125
Глава V. Межпопуляционная изменчивость Tulipa gesneriana L. по данным issr маркирования 126
5.1. Анализ ISSR 126
5.2. Популяционная структура 127
5.3. Заключение 137
Выводы 139
Список использованной литературы
