Введение
1. Литературный обзор 9
1.1. Фосфорилирование митохондриальных белков и регуляция функций митохондрий. 9
1.1.1. Обнаружение фосфорилированных белков в митохондриях. Попытки идентификации фосфобелкое. Локализация протеинкиназ и протеинфосфатаз в митохондриях . 9
1.1.2. Регуляция НАДН-дегидрогеназ цикла Кребса системой вторичных мессенджеров. Роль Са2+ и фосфорилирования, зависимого от протеинкиназ и протеинфосфатаз. 14
1.2. Са2+-транспортирующая система и участие Са2+ в регуляции митохондриальных функций. 17
1.2.1. Са 4-транспортирующая система митохондрий. 17
1.2.2. Неселективная Саг+, CysA-чувствительная пора во внутренней мембране митохондрий . 21
1.3. Структура и функционирование FoFj-АТРазы митохондрий. 26
1.3.1. Хемиосмотический синтез АТФ. Сопряжение транспорта РҐ и синтеза АТР. Регуляция окислительного фосфорилирования с помощью дыхательного контроля. 26
1.3.2. Субъединичная структура FoFi-АТРазы, локализация субъединицeF0uF{ секторах. 27
1.3.3. Современные представления о механизме работы FJ^r АТРазы. Вращение субъединиц eF0uF/ секторах. Роль субъединиц «а», «Ь» и «с» в транспорте ионов Н 30
2. Материалы и методы исследования 38
3. Результаты и обсуждение 47
3.1. Спектр фосфобелков и относительные уровни включения 32Р. 47
3.2. Влияние ЭГТА, Са2+ и СССР на фосфорилирование 3.5 кДа пептида. 49
3.3. Очистка и идентификация 3.5 кДа фосфопептида. 51
3.3.1. Определение локализации фосфопептида в митохондриях . 51
3.3.2. Выделение и очистка 3.5 кДа фосфопептида. 53
3.3.3. Идентификация 3.5 кДа пептида как полипептида, иммунореактивиого к антителам к субъединице «с» FJ7)-АТРазы.56
3.4. Фосфорилирование ИРАСП и активность F0Fi-ATPa3bi. 57
3.4.1. Влияние ионов Са па окислительное фосфорилирование и активность FoF гАТРазы. 57
3.4.2. Влияние физиологических концентраций Са2+ на фосфорилирование/дефосфорилирование ИРАСП. 60
3.5. Фосфорилирование ИРАСП и открытие тРТР. 62
3.5.1. Дефосфорилирование ИРАСП при открытии тРТР и падении мембранного потенциала . 62
3.5.2. Влияние ИРАСП на процесс открытия неселективной митохондриальной поры. 65
3.5.3. Влияй ие ИРА СП на проводимость БЛМ. 6 8
Заключение 73
Выводы 77
Литература 79
