Введение
Глава 1. Молекулярные механизмы лизоцим резистентности и антилизоцимнои активности бактерий (обзор литературы) 10
1.1. Неспецифические механизмы лизоцимрезистентности бактерий 12
1.1.1. Экранирование пептидогликана 12
1.1.2. Модификация пептидогликана 12
1.1.3. Секреция неспецифических ингибиторов 14
1.2. Специфические ингибиторы лизоцима белковой природы 16
1.2.1. Анионный термостабильный ингибитор 16
1.2.2. Ингибитор лизоцима позвоночных 16
1.2.3. Периплазматический и мембраносвязанный ингибиторы лизоцима 20
1.3. Регуляция продукции специфических ингибиторов лизоцима 23
Глава 2. Материал и методы исследования 28
2.1. Характеристика микроорганизмов, используемых в работе 28
2.2. Методы исследования профиля генетических детерминант ингибиторов лизоцима у исследуемых энтеробактерий 28
2.2.1. Методы и средства, использованные для филогенетического анализа и конструирования специфичных праймеров генетических детерминант ингибиторов лизоцима 28
2.2.2. Метод ПЦР-скрининга генетических детерминант ингибиторов лизоцима 30
2.2.3. Методики анализа плазмидной ДНК 31
2.3. Методы изучения ряда биологических свойств энтеробактерий 34
2.3.1. Определение профиля антибиотикорезистентности 34
2.3.2. Метод выявления лизоцимрезистентности энтеробактерий 34
2.3.3. Определение уровня антилизоцимной активности 35
2.3.3.1. Чашечный метод 35
2.3.3.2. Фотометрический метод 36
2.3.3.3. Метод определения сорбционного компонента АЛА 38
2.4. Способы регуляции антилизоцимной активности бактерий 39
2.4.1. Методы стимуляции антилизоцимной активности 41
2.4.2. Методы ингибирования антилизоцимной активности 42
2.5. Методы статистической обработки полученных результатов 43
Глава 3. Анализ генетических детерминант секретируемьгх ингибиторов лизоцима энтеробактерий 44
3.1. Анализ последовательностей гомологов генов секретируемых ингибиторов лизоцима 45
3.2. Филогенетический анализ геноврНС и ivyC энтеробактерий 49
3.3. Конструирование ПЦР тест-систем для выявления генов секретируемых ингибиторов лизоцима 53
3.4. Анализ распространенности генетических детерминант секретируемых ингибиторов лизоцима 57
3.5. Анализ плазмидного профиля исследуемых штаммов энтеробактерий 62
Глава 4. Лизоцимрезистентность и антилизо-цимная активность различных штаммов энтеробактерий 65
4.1. Общая антилизоцимная активность энтеробактерий, (чашечный метод) 65
4.2. Характеристика экскретируемого компонента антилизоцим ной активности энтеробактерий (фотометрический метод) 68
4.3. Характеристика сорбционного компонента антилизоцимной активности энтеробактерий, (фотометрический метод) 70
4.4. Скрининг лизоцимрезистентности энтеробактерий в комбинированной среде 72
Глава 5. Регуляция антилизоцимной активности штаммов энтеробактерий с различным генетическим профилем 77
5.1. Изменение антилизоцимной активности и копийности пДНК у штаммов Е. coli, отличающихся по плазмидному профилю под действием хлорамфеникола 78
5.2. Изменение антилизоцимной активности и копийности пДНК у штаммов Е. coli, отличающихся по плазмидному профилю под действием акридоновых соединений 80
5.3. Изменение антилизоцимной активности у энтеробактерий, отличающихся по присутствию pliC-мегаплазмид под действием хлорамфеникола и акридинового оранжевого 82
5.4. Влияние пептидогликанового стресса на уровень антилизоцимной активности 85
Заключение 89
Выводы 99
Список литературы 100
Список сокращений 113
