Введение
Глава 1. Обзор литературы 8
1.1. Основные этапы сперматогенеза человека 8
1.2. Эпигенетические механизмы регуляции экспрессии генов в сперматозоидах 13
1.3. Методы оценки состояния мужской фертильности 18
1.4. Генетические причины мужского бесплодия
1.4.1. Нарушения кариотипа 22
1.4.2. Микроделеции Y хромосомы 27
1.4.3. Микроделеции генов аутосомной локализации и генов хромосомы X 29
1.4.4. Нарушение расхождения хромосом в мейозе 31
1.5. Структурно-функциональные особенности генома сперматозоида 33
1.5.1. Нарушение компактизации хроматина созревающего сперматозоида 34
1.5.2. Повреждение ДНК сперматозоида в результате действия АФК 35
1.5.3. Апоптоз в процессе сперматогенеза 37
1.5.4. Влияние фрагментации ДНК сперматозоидов на оплодотворение, качество эмбрионов и наступление беременности в программах ВРТ 38
Глава 2. Материал и методы 42
2.1. Материал 42
2.2. Методы
2.2.1. Приготовление препаратов метафазных хромосом из лимфоцитов периферической крови 42
2.2.2. QFH - окрашивание препаратов метафазных хромосом 43
2.2.3. Флуоресцентная гибридизаця in situ 43
2.2.4. Спермиологический анализ 44
2.2.5. Методика приготовления препаратов из эякулята 45
2.2.6. Метод TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP Nick-End Labelling) 45
2.2.7. Предобработка препаратов из эякулята для иммунуцитохимической детекции 5-метилцитозина и 5-гидроксиметилцитозина с помощью антител 46
2.2.8. Иммунуцитохимическая детекция 5МеС и 5hMeC с помощью антител на препаратах из эякулята 47
2.2.9. Анализ препаратов 47
2.2.10. Статистический анализ з
3. Результаты 49
3.1. Анализ кариотипа пациентов с нарушением фертильности 49
3.2. Спермиологический анализ у пациентов с нарушением фертильности
3.2.1. Повторный спермиологический анализ у пациентов с нарушением фертильности 58
3.2.2. Спермиологический анализ для пациентов с аномалиями кариотипа 60
3.3. Оценка качества культивируемых in vitro эмбрионов и частоты появления эмбрионов с хромосомным дисбалансом у пациентов с аномалиями кариотипа 62
3.4. Анализ морфологии головок эякулированных сперматозоидов пациентов с нарушением фертильности 64
3.5. Анализ фрагментация днк сперматозоидов при нарушении фертильности 69
3.5.1. Анализ фрагментации ДНК сперматозоидов с учетом формы их головки 73
3.5.2. Влияние фрагментации ДНК сперматозоидов на эффективность оплодотворения и качество эмбрионов, культивируемых in vitro 75
3.6. Иммунодетекция 5-мес и 5-нмес в сперматозоидах из эякулята пациентов с нарушением фертильности 77
3.7. Сопоставление уровня фрагментации с уровнем гидроксилирования днк сперматозоидов в эякуляте пациентов с нарушением фертильности 79
4. Обсуждение 81
Заключение 91
Выводы 93
Список сокращений 94
Список литературы 95
