Введение
Глава I. Обзор литературы Рекомбинация плазмид с дрож жевыми хромосомами 9
Глава 2. Материалы и методы 20
2.1. ШтаММЫ дрожжей S. cerevisiae 20
2.2. Культуральные среды 20
2.3. Характеристика использованных плазмид . 20
2.4. Трансформация дрожжей 28
2.5. Методы генетического анализа 28
2.5.1. Анализ митотической стабильности трансформантов и интегрантов 28
2.5.2. Селекция /cirV трансформанта на высокую нестабильность и отбор интегрантов 29
2.5.3. Определение частоты хромосомной интеграции плазмиды (флуктуационный тест) 31
2.5.4. Эффективность споруляции гибридов . 32
2.5.5. Получение споровых сегрегантов и метод тетрадного анализа 33
2.5.6. Анализ митотической стабильности гибридов 36
2.5.7. Получение дрожжевых штаммов /cir/ генотипа 37
2.6. Методы биохимического анализа 39
2.6.1. Тест на бета-лактамазную активность 39
2.6.2. Определение 2 мкм ДНК 40
2.7. Анализ нуклеотидных последовательностей ДНК 40
Глава 3. Поведение эшсомной ш1азмиды в траншюрмантах и интегрантах 41
3.1. Стабильность трансформантов по плазмидному маркеру 41
3.2. Экстрахромосомяое наследование плазмиды pYP9i 45
3.3. Интеграция эписомнои плазмиды pYF9i в дрож жевые хромосомы 47
3.3.1. Эффективность интеграции эписомнои плазмиды 47
3.3.2. Специфичность хромосомной интеграции эписомнои плазмиды 48
3.3.2.1. Идентификация хромосом, в которые произошла интеграция плазмиды 49
3.3.2.2. Картирование сайтов интеграции плазмиды в химерных хромосомах 54
А. Картирование сайтов интеграции плазмиды в Ш химерной хромосоме 56
Б. Картирование сайтов интеграции плазмиды в других химерных хромосомах 59
3.3.3. Экспрессия и наследование бактериального гена в составе интегрированной плазмиды 63
3.3.4. Стабильность химерных хромосом в гаплоидных интегрантах 65
Глава 4. Мейотическая рекомбинация у диеловдов, содеиащих интегрированную ішазмиду 71
4.1. Выживаемость спор в тетрадах гибридов, содержащих интегрированную плазмиду 71
4.2. Нерегулярное расщепление по плазмидным и хромосомным маркерам 81
4.3. Влияние интегрированной плазмиды на мейотический кроссинговер 93
Глава 5. Митоїическая дестабилизация шлерных хромосом в дишюидах 100
5.1. Дестабилизация химерных хромосом в гибридах интегрантов по Ш хромосоме 101
5.2. Дестабилизация химерных хромосом в гибридах интегрантов по І, ІУ и У хромосомам 108
5.2.1. Дестабилизация I химерной хромосомы 108
5.2.2. Дестабилизация ІУ химерной хромосомы 115
5.2.3. Дестабилизация У химерной хромосомы 118
5.3. Дестабилизация неидентифицированных химерных хромосом 131
5.4. Дестабилизация химерных хромосом в Rad" диплоидах 135
Глава 6. Обсуждение 138
Выводы 167
Приложение Штаммы дрожжей, сконструированные в ходе работы 169
Использованная литература
