Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. Технология биологических микрочипов 9
1.2. Аналоги клеточных микрочипов 11
1.3. Иммобилизация клеток. Гелевые основы для иммобилизации живых клеток 15
1.3.1. Агароза 16
1.3.2. Альгинат 17
1.3.3. Полиакриламид 18
1.3.4. ПАА-гидразид 19
1.4. Влияние иммобилизации микроорганизмов в ПААГ на их жизнеспособность 19
1.5. Физиология и морфология иммобилизованных клеток, характер роста в геле 21
1.6. Биосенсоры на основе иммобилизованных клеток... 22
1.7. Выводы к главе 1 24
Глава 2. Материалы и методы 25
2.1. Реактивы, штаммы и условия культивирования 25
2.2. Компоненты гелеобразующих растворов 26
2.2.1. Акриламид и бисакриламид... ..26
2.2.2. Персульфат аммония 26
2.2.3. ТЭМЕД 27
2.2.4. Полиакриламид-гидразид 27
2.2.5. Агароза, альгинат 28
2.2.6. Глицерин 29
2.3. Подготовка подложки для ГКМ 29
2.4. Оценка токсичности компонентов 29
2.5. Введение флюоресцентной метки в живые бактериальные клетки 30
2.6. Регистрация флюоресценции и люминесценции ячеек ГКМ. Обработка данных 31
2.7. Инкубационная камера 34
Глава 3. Конструирование гидрогелевого клеточного микрочипа 35
3.1. АгарозныйГКМ 35
3.2. Полиакриламидный ГКМ 38
3.2.1. Влажность атмосферы 39
3.2.2. Размер ячеек 42
3.2.3. Температураполимеризиции 44
3.2.4. Скорость полимеризации 44
3.2.5. Акриламид и бисакриламид 48
3.2.6. Глицерин 49
3.2.7. Осмолярность ГР 49
3.2.8. Персульфат аммония 50
3.2.9. ТЭМЕД 50
3.2.10. Изготовление полиакриламидного клеточного микрочипа 50
3.2.11. Установки для полимеризации ПКМ 52
3.3. Полиакриламид-гидразидный ГКМ 55
3.4. Альгинатный КМ 56
3.4.1. Способ химической пришивки альгината к поверхности подложки 57
3.4.2. Изготовление альгинатного клеточного микрочипа 58
3.5. Хранение КМ: 60
3.6. Выводы к главе 3 61
Глава 4. Исследование внутриклеточных процессов и детекция химических соединений с помощью км 63
4.1 Детекция антибиотиков 63
4.2. Количественный анализ антибиотиков 65
4.3. Мониторинг синтеза НК и белка у прокариот и дрожжей. Оценка влияния веществ на синтез НК и белка у Е.соН на примере хлорамфеникола 67
4.4. Обнаружение и количественое определение веществ, индуцирующих флюоресцентные и биолюминесцентные репортеры 73
4.5. Выводы к главе 4 79
Заключение 80
Список литературы 83
