Введение
1. Общая характеристика работы 6
1.1. Актуальность проблемы. 6
1.2. Задачи исследования. 8
1.3. Научная новизна результатов исследования . 8
1.4. Практическая ценность 9
1.5. Апробация работы 9
2. Обзор литературы 11
Механизмы подавления экспрессии генов, опосредованного разными классами коротких рнк у животных.
2.1. Введение 11
2.2. Класс siPHK 11
2.2.1. Механизм продукции и функции siPHK 11
2.2.2. Биологическая роль siPHK 15
2.3. Класс miPHK 16
23Л. Механизм продукции и функции miPHK 16
2.3.2. Биологическая роль miPHK 20
2.4. Класс rasiPHK и piPHK 23
2.4.1. rasiPHK 23
2.4.2. rasiPHK и гибридный дисгенез 24
2.4.3. piPHK позвоночных 26
2.4.4. Биологическая роль piPHK 29
2.5. Белки, участвующие в продукции и функции коротких РНК 30
2.5.1. Белки Drosha 30
2.5.2. Белки Dicer 32
2.5.3. Белки, содержащие дцРНК-связывающие мотивы 35
2.5.4. Семейство Argonaute 36
3. Материалы и методы 42
3.1. Биологические материалы 42
3.2. Генетические скрещивания 43
3.3. Продукция терминальных клонов, гомозиготных по мутации в гене dicer-І, с помощью митотической рекомбинации 44
3.4. Гистохимическая окраска органов на активность галактозидазы 45
3.5. Выделение тотальной РНК Drosophila для Northern-блот гибридизации, микрочипа и количественного RT-PCR 46
3.6. Дизайн проб для исследования экспрессии коротких РНК и анализ результатов, полученных с помощью микрочипа 46
3.7. Northern-блот гибридизация коротких молекул РНК 47
3.8. Анализ химической структуры rasiPHK и miPHK 50
3.9. Количественный RT-PCR 51
3.10. Иммунопреципитация коротких молекул РНК, взаимодействующих с Agol, Aubergine и PIWI 52
3.11. Western-блот анализ 53
4. Результаты 55
4.1.Сравнение закономерностей процессинга rasiPHK и siPHK in vivo 55
4.2. Гены, необходимые для биогенеза rasiPHK 59
4.3. Продукция и функция rasiPHK не зависит от активности белка Dicer-1 64
4.4. Характеристика химической структуры rasiPHK 66
4.5. rasiPHK специфически взаимодействуют с PIWI подсемейством белков Argonautc 68
5. Обсуждение результатов 72
5.1. Преимущественное накопление антисмысловых rasiPHK 72
5.2. Роль белков Armitage, Spindle-E, PIWI, Aubergine в продукции и функции rasiPHK 73
5.3. Процессинг rasiPHK 75
5.4. Модификация 3 конца rasiPHK 80
5.5. Биогенез rasiPHK - третий независимый путь действия коротких РНК в терминальной ткани 82
5.6. Природная роль rasiPHK 84
5.7. Общность биогенеза rasiPHK и piPHK 88
6. Выводы 93
7. Литература
