Введение
ГЛАВА 1. Молекулярные механизмы возникновения устойчивости mycobacterium tuberculosis к антибиотикам и методы определения резистентности. Обзор литературы 3
1.1 История распространения туберкулеза 3
1.2 Подходы к лечению туберкулеза 6
1.3 Противотуберкулезные антибиотики 8
1.4 Развитие устойчивости М. tuberculosis к антибиотикам 12
1.5 Механизмы устойчивости к отдельным противотуберкулезным препаратам 13
Рифампицин 13
Изониазид 14
Стрептомицин 18
Пиразинамид 19
Этамбутол 20
Фторхинолоны 21
Канамицин, амикацин, виомицин, капреомицин 23
1.6 Методы диагностики лекарственной устойчивости 25
Микробиологические методы 25
Молекулярно-биологические методы 27
Заключение 36
ГЛАВА II. Результаты и обсуждение 37
2.1 Разработка метода аллель-специфичной истощающей ПЦР 37
Принцип метода аллель-специфичной истощающей ПЦР. 37
Критические параметры метода 38
Эффективность аллелъной дискриминации в АСИ ПЦР в зависимости от исследуемой мутации и природы 3 концевого нуклеотида праймера 41
Эффективность АСИ ПЦР для анализа смешанных образцов ДНК, содержащих несколько аллелей. 44
2.2 Адаптация метода АСИ ПЦР для определения устойчивости к антибиотикам и филогенетических исследований однонуклеотидного полиморфизма 45
Детекция устойчивости крифампицину и изониазиду 45
Детекция устойчивости к этамбутолу и фторхинолонам 47
Адаптация АСИ ПЦР для филогенетических исследований однонуклеотидного полиморфизма 51
2.3 Применение метода АСИ ПЦР для генотипирования клинических изолятов М. tuberculosis 54
Определение мутаций, приводящих к лекарственной устойчивости 55
Молекулярная эпидемиология 56
Метод АСИ ПЦР для идентификации клинических изолятов, содержащих несколько штаммов М. tuberculosis 60
ГЛАВА III. Практическая часть 64
Материалы 64
Методы 66
Выводы 75
Благодарности 76
