Введение
Глава 1. Материалы и методы
1.1. Вирусы, клеточные культуры, лабораторные животные, препараты 49
1.2. Методы исследования 50
1.2.1. Реакция нейтрализации 50
1.2.2. Непрямой метод флуоресцирующих антител (МФА) 50
1.2.3. Метод бляшкообразования 51
1.2.4. Получение антигенов вируса ЛДР 51
1.2.5. Получение гипериммунной асцитной жидкости к ВЛДР. 52
1.2.6. Выделение специфических IgG-антител на протеин А-сефарозе 52
1.2.7. Конъюгирование специфических IgG-антител с пероксидазой хрена 52
1.2.8. ИФА для выявления специфического антигена ВЛДР 53
1.2.9. Выделение РНК вируса ЛДР из различных образцов 53
1.2.10. Проведение ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в реальном времени для выявления РНК вируса ЛДР 54
1.2.11. Анализ результатов ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в реальном времени 56
1.2.12. Конструирование генно-инженерного положительного контроля 57
1.2.13. Определение первичной нуклеотидной последовательности генаОпВЛДР 59
1.2.14. Построение филогенетического дерева 60
Результаты исследований
Глава 2. Культивирование и идентификация штамма Entebbe вируса ЛДР 62
Глава 3. Филогенетический анализ штамма Entebbe вируса ЛДР
3.1. Определение полной нуклеотидной последовательности гена Gn вируса ЛДР 64
3.2. Построение филогенетического дерева 65
3.3. Определение различий в антигенных детерминантах гена Gn у близких штаммов ВЛДР 67
Глава 4. Разработка тест-систем «гнездовой» ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в реальном времени для выявления РНК вируса ЛДР
4.1. Подбор праймеров, оптимизация условий проведения ПЦР 68
4.2. Определение специфичности ПЦР тест-систем 73
4.3. Определение чувствительности ПЦР тест-систем 74
4.4. Конструирование генно-инженерного положительного контроля для тест-систем ПЦР 76
Глава 5. Разработка и характеристика тест-системы ИФА для выявления антигена вируса ЛДР
5.1. Антигены, иммуноглобулины, конъюгаты 78
5.2. Определение специфичности метода ИФА 80
5.3. Определение чувствительности метода ИФА 81
Глава 6. Изучение действия рибавирина и его производных на цитопатогенную активность вируса ЛДР 82
Обсуждение результатов 86
Выводы 95
Список литературы
