Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
Иммунофенотипирование лейкоцитов в онкологической практике 10
1.1. Проточная цитометрия как современный метод анализа клеточных популяций 10
1.2. Характеристика флуорофоров, используемых в проточной цитометрии для конъюгирования с моноклональными антителами 14
1.3. Иммунологические маркеры 21
1.4. Практическое использование проточной цитометрии в научных и клинических исследованиях в онкологической практике 26
ГЛАВА 2. Материалы и методы 43
2.1. Материалы 43
2.2. Доноры и онкологические больные 45
2.3. Получение асцитической жидкости 45
2.4. Выделение и очистка антител 46
2.5. Определение концентрации белка методом спектрофотометрии 48
2.6. Метод гель-фильтрации 49
2.7. Выделение мононуклеарных клеток периферической крови 49
2.8. Активация лимфоцитов ФГА 50 2.9. Прямая реакция иммунофлуоресценции (РИФ) 50
2.10. Непрямой метод иммуно флуоресцентного анализа 51
2.11. Метод проточной цитометрии 51
2.12. Статистическая обработка данных 52
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение собственных исследований 53
3.1. Получение флуоресцентных зондов на основе МКА серии ИКО и флуоресцентных красителей 53
3.1.1. Получение конъюгатов МКА с цианиновыми красителями Imd-306, Imd-504/506/507 и СуЗ 53
3.1.2. Получение конъюгатов МКА с синтетическим флуорофором А1еха-488 57
3.1.3. Получение конъюгатов МКА с флуорофором группы фикобилипротеинов R-PE (фикоэритрин) 60
3.2. Исследование биологической активности полученных флуоресцентных зондов в одноцветном анализе субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии. Определение рабочих концентраций конъюгатов моноклональных антител с флуоресцентными зондами 71
3.2.1. Изучение биологической активности конъюгатов МКА с цианиновыми флуорофорами СуЗ, Imd-306, Imd-506 72
3.2.2. Изучение биологической активности конъюгатов МКА с синтетическим флуорофором А1еха-488 91
3.2.3. Изучение биологической активности конъюгатов МКА с РЕ 100
3.2.4. Исследование биологической активности полученных флуоресцентных зондов в многоцветном анализе субпопуляций лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии 111
3.2.4.1. Двухцветный анализ 111
3.2.4.2. Трехцветный анализ 133
4.1 Клиническая апробация набора флуоресцентных зондов 140
Глава 4. Заключение 146
Выводы 157
Сокращения, встречающиеся в тексте 159
Список литературы 161
